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农杆菌侵染烟草实验注意事项
经
农杆菌侵染
后的外植体污染不断,怎么处理
答:
在接种过程中应注意以下几点:掌握外植体在菌液中浸泡的时间:有助于减少后继培养中可能造成的污染
,并可减轻细菌对植物细胞的毒害作用,
一般控制在数秒钟至数分钟内
,以叶盘边缘充分湿润为度.浸泡时间太短农杆菌尚未接种到伤口面,在其培养时无农杆菌生长,不能转化.如果外植体在菌液中浸泡时间太长,常因农杆...
...在河南华溪蟹中找到了金属硫蛋白基因,并以
农杆菌
的质粒为载体...
答:
9、取出共培养的烟草叶片及茎段,
用添加500mg/LCef的无菌水冲洗5次,次放置于摇床摇30min,以洗去外植体表面的农杆菌
;10、取出后,用滤纸吸干,转移到烟草诱芽培养基上,诱芽培养基为MS+BA1.0mg/L+Hygmg/L+Cef500mg/LpH5.8;过2周观察,如果发现不长菌,则降低Cef浓度。如果长菌,则继续...
为了更好研究HD1基因的亚细胞定位,我们构建了含有35s启动子:HD1-GFP的...
答:
1 载体转化入
农杆菌
;2 工程菌单克隆于YEB培养基 28℃,过夜培养;3. 1%扩大培养于新培养基(YEB+100uM AS+ 10mM Mes【pH5.7】);4 收集农杆菌,用注射液(10mM MgCl2+10mMMes【pH5.7】)+20uM AS;)将农杆菌稀释至OD600=1左右,室温活化3h;5 用注射器注射
烟草
成熟叶片; 6 避光2-3...
烟草
瞬时
侵染
时
农杆菌
要现摇现用吗
答:
当然,任何植物侵染都是现摇现用,这样农杆菌的活性能保证。农杆菌侵染时需要OD值在0.5左右,
就是要在菌种对数增长期活性最强时侵染效果最好
。
培养
农杆菌
的利福平怎么配?
答:
一般都用甲醇或DMSO配制,溶解度还是可以的,一般为20-50mg/ml稀释一千倍用;在配制后会有一些沉淀,在使用的时候混匀后用就可以了。甲醇和DMSO不会对
农杆菌
有影响。
在培养基中添加酚类物质的目的
答:
在培养基中添加酚类物质的目的是吸引
农杆菌侵染烟草
细胞,有利于启动子P和M基因成功转化。用含有卡那霉素和X-Gluc的培养基可筛选出所需的烟草细胞,在卡那霉素中能存活说明获得了质粒,能将X-Gluc水解成蓝色说明获得了基因M,筛选出的烟草细胞经过植物组织培养可获得转基因植株。由于酚类物质其羟基取代的...
农杆菌侵染烟草
中茎段为什么会变黑
答:
任何植物侵染都现摇现用农杆菌性能保证
农杆菌侵染
需要OD值0.5左右要菌种数增期性强侵染效
烟草
由于受烟草花叶病毒的
侵染
而减产,我国科学家利用基因工程技术成功培 ...
答:
(1)PCR扩增的前提是要有一段已知核苷酸序列目的基因(抗
烟草
花叶病毒基因),以便合成引物Ⅰ、Ⅱ.该DNA分子通过PCR扩增三次得到23=8个DNA片段,需要引物23-1=7对,因此其产物中含有引物I的DNA片段所占的比例为78.(2)由以上分析可知,过程①是将基因表达载体导入
农杆菌
的过程;为了便于目的基因的...
农杆菌
在4℃放一段时间还能
侵染烟草
吗
答:
放多长时间?一般4度可以放2个周,两周后活性会降低!
简述植物基因启动子的类型和特点。
答:
目的基因过量表达载体构建完成后,有多种使用途径,其中最常用的有以下两种:一,通过农杆菌介导或基因枪法等转化稳定表达系统,如拟南芥、水稻、
烟草
、番茄等,获得转基因阳性苗;二,通过PEG-Ca2+介导转化法或电击法转化原生质体,如水稻、拟南芥,或通过
农杆菌侵染
或注射法转化烟草叶片,进行亚细胞定位或...
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