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如何看pcr溶解曲线
怎么
通过Q-
PCR的
扩增曲线和
溶解曲线
来分析结果,
如何
通过曲线来判断结果...
答:
(1)溶解曲线是判断扩增产物是否单一的曲线
,顾名思义,其跟模板(或其浓度)没有关系,扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线;(2)一般SYBR法的目的基因在80~90℃之间;(3)出现其他峰就该考虑是否为引物二聚体(一般为60~75℃之间)视引物长度而定,而基因组DNA污染的峰会在90℃以后。出现...
怎么
理解荧光定量
pcr的溶解曲线
答:
荧光定量
pcr的溶解曲线
理解:用Syber Green方法做完PCR后,用来判断产物是否相对专一。应结束后,逐渐加温。和Syber Green分子结合的PCR产物随温度升高逐渐变为单链,就不能在和Syber Green结合。一般每加温一度,读一次信号。当温度到达PCR产物的Tm时,产物解离一下增多。曲线的横坐标是温度,而纵坐标是荧...
技能学习——Qpcr结果分析(原理和
溶解曲线
)
答:
Qpcr的基本原理是,通过在反应体系中添加荧光标记,实时监测
PCR
扩增过程中荧光信号的变化。随着循环数增加,荧光信号的变化会形成一条
曲线
,横坐标是循环数,纵坐标是荧光信号强度。曲线上的荧光阈值是人为设定的值,通常在指数扩增阶段设定,用来判断扩增开始的时间。Ct值(Cycle Threshold)则表示信号达到设定...
什么是realtime-
PCR溶解曲线
答:
下面从几个方面来解读:1、随着温度的升高,DNA双链断裂;接着温度降低,到达退火温度的时候,DNA双链复性,荧光分子绑定在DNA双链上,所以荧光信号值到达最高点。上面的是反映在扩增曲线上面的。2、接着DNA双链分子由退火温度约60度,继续升温,双链断开,DNA分子溶解。请注意
溶解曲线
的纵坐标,表示单...
如何
分析定量
pcr 溶解曲线
答:
如果有两个峰甚至多个峰,说明引物不特异,你得到的Ct值是不可信的。还有如果出现峰的温度低,很可能是Dimer,而不是你的目的产物。如果你相同样品各管的
溶解曲线
都只有一个尖锐的峰,而且不是Dimer,说明你的扩增的产物是稳定正确的,数据可以采用。它只是反映
PCR
完后,产物的情况,不能得出Ct值。
从q
PCR溶解曲线
判断PCR产物的相对大小
答:
在做qPCR的时候,40个循环之后,都会插入一步(6):绘制
溶解曲线
。上图的三种颜色代表了我三种不同的
PCR
产物片段(3个基因)从左至右依次(产物名称,产物大小,GC含量,GC碱基对):A(蓝色),141bp,59%,84 B(红色),138bp,61%,85 C(绿色),169bp,58%,99 结果会发现,溶解温度与产物...
怎么
通过Q-
PCR的
扩增曲线和
溶解曲线
来分析结果,
如何
通过曲线来判断结果...
答:
1、扩增
曲线
:一般来说如果你做双ΔCT法那么你的扩增曲线必须是S型,有明显的四个时期,且复孔的CT值尽量一致,相差不要超过0.5个CT值(上限是1个CT值);同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增,其相差的CT值为相差浓度倍数的2次开方。比如同一种CDNA5倍浓度稀释,那么同一种基因扩增的前提下...
荧光定量
pcr溶解曲线
没有峰
答:
荧光定量
pcr溶解曲线
没有峰是因为:一般每加温一度,读一次信号,当温度到达PCR产物的Tm时,产物解离一下增多,曲线的横坐标是温度,纵坐标是荧光信号的变化,开始加热,信号变化不大,所以几乎是平的。当加热接近于PCR产物Tm时,双链开始解离,荧光强度变小,机器会比较前后2个温度点的荧光强度,把2者...
你好,我想请问你关于real-time
PCR 中溶解曲线
的横轴和纵轴的意义?_百 ...
答:
一开始加热的时候,虽然荧光强度比较强,但是由于双链没有解离,所以荧光强度保持不变。当加热接近于
PCR
产物Tm时,双链开始解离,荧光强度变小,机器会比较前后2个温度点的荧光强度,然后把2者的差值标在图上。Tm到达时,有一般双链解离,这时的荧光强度变化最大(峰值)。再加热,双链全部解离,所以...
PCR溶解
度
曲线怎么看
?
答:
单峰表示产物单一,说明你设计的引物较特异 双峰的话,说明除了目标产物外还有其他的影响
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