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碱裂解法提取质粒DNA
碱裂解法提取质粒
答:
5. 向离心管中加入250µl Buffer P2,温和地上下颠倒混匀4~6次,获得澄清的
裂解
液;(剧烈混合会使剪切染色体
DNA
,降低
质粒
纯度)6. 向离心管中加入350µl Buffer N3, 立即温和地上下颠倒混匀4~6次,此时出现白色絮状沉淀。室温10000rpm离心15min;7. 小心将步骤6中所得的上清液转移至...
大肠杆菌
质粒DNA
怎样
提取
,用什么
方法
?
答:
碱裂解法
:此方法适用于小量
质粒DNA的提取
,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下:1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。2、37℃振荡培养过夜。3、取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3min,弃上清液。4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/L EDTA pH8.0,25mM/L...
如何
提取
大肠杆菌
质粒DNA
?
答:
碱裂解法
通常有大量
提取法
和小量提取法,其提取原理是一样的,只需体积按一定比例扩大。纯化
质粒DNA
时通常还利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。开始进行克隆时,对于小量制备的质粒DNA,经过苯酚、氯仿
抽提
。RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA,所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化...
质粒dna的提取
与基因组dna的提取在原理和
方法
方面有何异同
答:
质粒DNA提取
一般用沸水浴法和
碱裂解法
,现在一般都采用碱裂解法,并有试剂盒可用。它主要是将细胞内的环状
质粒提取
出来,一般需要用SDS裂解,RNA酶降解,然后过柱,再进行洗脱.过程比较简单。而基因组DNA提取则较为复杂,也需要用SDS裂解和RND酶降解,但降解时间较长,同时对有些革兰氏阳性细菌还要进行溶...
碱裂解法提取质粒DNA
中哪些因素影响核酸的沉淀?
答:
碱裂解法提取质粒DNA
中温度和湿度会影响核酸的沉淀。
碱裂解法提取质粒dna
中高PH的溶液会使细胞壁粕类从而使得DNA和蛋白质变性。细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中,会使细胞壁破裂,染色体DNA和蛋白质变性,将质粒DNA释放到上清中。碱裂解法的原理:当菌体在NaOH 和SDS 溶液中裂解时,蛋白质与...
用
碱裂解法提取质粒DNA的
,加入溶液1,容液2,容液3后各有哪些现象,原因是...
答:
溶液2中的主要成分是NaOH和SDS,是用来
裂解
细胞的。因为NaOH遇到二氧化碳容易反应生成碳酸氢钙,影响使用效果,因此要现配现用。SDS的话,低温容易产生沉淀。不过在37°C 水浴一下就好。主要还是NaOH的问题。溶液1主要是让菌体细胞充分悬浊于溶液,没有什么实际意义,可以不要。溶液2是碱液,目的在彻底破坏...
碱裂解法
制备
质粒dna
时,溶液1,2,3中各组分都起什么作用
答:
碱裂解法
制备
质粒DNA
时,溶液Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ中各组分的作用:1、溶液Ⅰ:葡萄糖是使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部;EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂,其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性;可添加RNase A消化RNA。2、溶液Ⅱ 此步为碱处理。其中NaOH主要是为了...
试述
碱裂解法提取质粒
的基本原理及关键试剂的作用
答:
试述
碱裂解法提取质粒
的基本原理及关键试剂的作用如下:将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中,会使细胞壁破裂,染色体DNA和蛋白质变性,将
质粒DNA
释放到上清中。尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏,闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离,这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。只要用碱处理的强度和时间不...
碱裂解法
分离
提取质粒DNA的
基本原理是:()
答:
碱裂解法
分离
提取质粒DNA的
基本原理是:()A.碱性条件下染色体DNA变性,去除变性条件后,可以复性;而质粒DNA则相反。B.碱性条件下质粒DNA变性,去除变性条件后,可以复性;而染色体DNA则相反。正确答案:A
碱裂解法
制备
质粒dna
时,溶液1,2,3中各组分都起什么作用
答:
碱裂解法
制备
质粒DNA
时,溶液Ⅰ中的葡萄糖成分的主要作用是防止大肠杆菌沉淀,保持其悬浮状态。EDTA的作用是螯合钙离子和镁离子等二价金属离子,从而抑制DNase的活性。此外,可以添加RNase A来消化RNA。溶液Ⅱ是碱处理步骤的关键,其中NaOH的作用是溶解细胞,释放DNA。在强碱性条件下,细胞膜由双层结构转变...
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