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碱裂解法
什么是
碱裂解法
?
答:
抽提质粒DNA常用碱裂解法,它是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法
,其基本原理为:在碱性条件(pH12.5)下,线性染色体DNA的双螺旋结构解开而变性,质粒DNA的氢键虽然断裂,但两条互补链彼此缠绕,紧密结合在一起。
碱裂解法
提取质粒
答:
5. 向离心管中加入250µl Buffer P2,温和地上下颠倒混匀4~6次,获得澄清的
裂解
液;(剧烈混合会使剪切染色体DNA,降低质粒纯度)6. 向离心管中加入350µl Buffer N3, 立即温和地上下颠倒混匀4~6次,此时出现白色絮状沉淀。室温10000rpm离心15min;7. 小心将步骤6中所得的上清液转移至...
分子实验查漏补缺系列:SDS
碱裂解法
制备质粒DNA
答:
VII. 加入200微升新鲜配制的
碱裂解
液II,轻柔颠倒离心管5次,确保混合均匀,然后将管置于冰上。碱裂解液II必须新鲜配制,以防NaOH吸收CO2导致碱性减弱。VIII. 加入150微升冰预冷的碱裂解液III,确保溶液在粘稠的细菌裂解物中分散均匀,然后置于冰上3至5分钟。碱裂解液III中的醋酸用于中和NaOH,避免长时...
碱性
裂解法
提取质粒DNA原理是什么?
答:
碱裂解法通常有大量提取法和小量提取法,其提取原理是一样的,只需体积按一定比例扩大
。纯化质粒DNA时通常还利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。开始进行克隆时,对于小量制备的质粒DNA,经过苯酚、氯仿抽提。RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA,所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化...
碱裂解法
提取质粒时,试述溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ的主要成分及作用原理...
答:
DNA在pH5~9的溶液中是稳定的,但当pH>12或pH<3时,就会引起DNA双链之间氢键的解离而变性。溶液Ⅱ中NaOH浓度为0.2mob/L,加入溶液Ⅱ后,该系统的pH为12.0~12.6,因而促使染色体DNA与质粒的变性解离成单链。SDS是一种阴离子去垢剂,它的主要作用有:①溶解细胞膜上的脂肪与蛋白,因而溶解膜...
碱裂解法
中哪些步骤或者试剂帮助核酸的沉淀
答:
碱裂解法
是提取质粒的最常用也最有效的方法,是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异达到分离目的.原理:高pH使质粒DNA和染色体DNA变性,同时沉淀蛋白质.再将pH值调至中性,质粒DNA较小,很容易复性成双链.而染色体DNA较大,缠结成网状不溶物质,从而可以通过离心除去.方法:依次加入下面三种溶液:溶液1:...
碱裂解法
分离提取质粒DNA的基本原理是:()
答:
碱裂解法
分离提取质粒DNA的基本原理是:()A.碱性条件下染色体DNA变性,去除变性条件后,可以复性;而质粒DNA则相反。B.碱性条件下质粒DNA变性,去除变性条件后,可以复性;而染色体DNA则相反。正确答案:A
碱裂解法
提取质粒dna的原理是什么?
答:
质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子,重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA 分子。目前已有许多方法可用于质粒DNA 的提取,本实验采用
碱裂解法
提取质粒DNA。纯化质粒DNA 的方法通常是利用了质粒DNA 相对较小及共价闭环两个性质。例如,氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心、离子交换层析、凝胶过滤层析、聚乙二醇...
碱裂解法
制备质粒dna时,溶液1,2,3中各组分都起什么作用
答:
碱裂解法
制备质粒DNA时,溶液Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ中各组分的作用:1、溶液Ⅰ:葡萄糖是使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部;EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂,其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性;可添加RNase A消化RNA。2、溶液Ⅱ 此步为碱处理。其中NaOH主要是为了...
用
碱裂解法
提取质粒DNA的,加入溶液1,容液2,容液3后各有哪些现象,原因是...
答:
溶液2中的主要成分是NaOH和SDS,是用来
裂解
细胞的。因为NaOH遇到二氧化碳容易反应生成碳酸氢钙,影响使用效果,因此要现配现用。SDS的话,低温容易产生沉淀。不过在37°C 水浴一下就好。主要还是NaOH的问题。溶液1主要是让菌体细胞充分悬浊于溶液,没有什么实际意义,可以不要。溶液2是碱液,目的在彻底破坏...
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