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蛋白活性保护方法
如何在盐析和透析操作中维持
蛋白质
的各种
活性
?
答:
盐析和透析是利用蛋白质的物理化学性质
,以非色谱的方法进行纯化,克服色谱方法纯化贻贝粘蛋白设备和材料成本高的问题。整个操作均在冰水浴中进行,这样可以保证整个盐析和透析操作中的酶不会有太多的分解。用蒸馏水将透析液用半透膜过滤,滤过的液体进入烧杯,用硫酸钡检验滤液,如果检测到硫酸根存在,重复以...
DTT用来
保护蛋白
的终浓度是什么
答:
以摩尔数计算,5-10倍的量来保护-SH。
如果蛋白报存buffer中含有15%左右的甘油,对蛋白具有很好的稳定作用
。补充一点:如果dtt和蛋白摩尔比例比例增大到1:100,DTT就能破坏2硫键了,这时对应的浓度一般在10mM左右。
如何抑制蛋白酶的
活性
以防止其降解我们所需的
蛋白质
产品?
答:
但过于剧烈的变性反应有可能导致你想要的蛋白质也遭受变性的影响。
所以推荐用蛋白酶抑制剂
。比如PMSF,抑制四氨酸蛋白酶和巯基蛋白酶。EDTA可以抑制金属蛋白酶,因为它可以螯合蛋白酶的关键离子钙离子。胃蛋白酶抑制剂可以抑制酸性蛋白酶。
蛋白质活性
的快速调节
方法
有哪些
答:
虽然酶也是一种蛋白质,但是还是说酶的活性快速调节方法比较准确一些。
一般可以通过调节pH和温度来快速调节酶活性
。酶活性在最适pH和最适温度时处于最高,将pH和温度在最适值调高或者调低,都可以快速降低酶活性。调节酶的浓度 酶浓度的调节主要有两种方式,一种是诱导或抑制剂的合成;一种是调节酶的降...
对于含有
蛋白质
或抗生素等物质的液体,需采用的除菌
方法
是?
答:
对于含有蛋白质的液体,如果要保持蛋白质的活性,
则应当采用温和的消毒方式,例如巴氏消毒法、加入抗生素、适度辐照等
。如果不考虑蛋白质的活性,或者蛋白质本身就应该失活,那么可采用高温高压消毒等。对于含有抗生素的液体,应该加入其它类型的抑菌物质(例如液体中原本有喹诺酮类抗生素,可以再添加β-内酰胺...
蛋白质
沉淀了就变性了吗?用什么
方法
能让它溶解且有
活性
答:
蛋白质
在受到光照、热、有机溶剂以及一些变性剂的作用时,次级键受到破坏,导致天然构象的破坏,使蛋白质的生物
活性
丧失。如果变性条件剧烈持久,蛋白质的变性是不可逆的。如果变性条件不剧烈,这种变性作用是可逆的,说明蛋白质分子内部结构的变化不大。这时,如果除去变性因素,在适当条件下变性蛋白质可恢复...
超低温冰箱取出
蛋白
酶怎么样融化才能最大限度地
保护
酶免受冻融损伤...
答:
对于蛋白来说,一般是需要速冻慢融。也就是冻的时候如果体积较大,需要利用液氮让蛋白溶液迅速结冻。而化冻的时候需要更加缓和的条件。过快溶解容易出现变性沉淀。蛋白酶在冻存时一般应该适当添加一些保护剂,比如甘油,这样冻融可以
保护蛋白
酶的
活性
。而且蛋白酶不建议反复冻融。
有多少种
方法
来调节细胞中的
蛋白质
答:
别构效应中的先前结合的配体能够增加或者降低后续配体结合与同一个蛋白质的亲合力,根据先前配体与后续配体是否相同,可分同促效应和异促相应,两者效应均不限于先前结合配体会促进后续配体的结合,也包括阻碍后续配体与蛋白质的结合。配体与蛋白质的相互作用至少调节
蛋白质活性
阶段不涉及共价键形成,底物在...
沉淀
蛋白质
的
方法
及对蛋白质的
活性
有何影响
答:
蛋白质
溶液中加入高浓度中性盐破坏胶体的稳定性,中和蛋白质所带的电荷,又可以破坏水化膜.此法沉淀蛋白质一般不变性,可通过透析出去中性盐,仍保持生物学
活性
.有机溶剂:利用它们的强亲水性破坏水化膜,由于它们不能中和蛋白质所带电荷,需要在pI附近沉淀蛋白质.低温条件下,变性发生缓慢,可用来制备血浆蛋白质...
硫酸铵的作用与用途分别是什么?
答:
加入电镀液中能增加导电性。也是食品酱色的催化剂,鲜酵母生产中培养酵母菌的氮源。用途:多用于蛋白纯化工艺方面,因为硫酸铵属于惰性物质,不易与其他生物活性物质发生反应,在纯化过程中能最大程度的
保护蛋白活性
,另外,硫酸铵的可溶性极好,能形成高盐环境,对于蛋白沉淀与后续的高盐纯化做准备。
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