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NEB的酶切反应体系
酶切体系
中各物质
neb
酶 缓冲液 buffer的作用?
答:
1.
NEB 酶
为限制性内切酶,对目的片段特异性序列进行识别与酶切;2.Buffer的作用是维持
反应体系
的酸碱度的稳定。
酶切体系
中各物质
neb
酶 缓冲液 buffer的作用?
答:
1.
NEB 酶
为限制性内切酶,对目的片段特异性序列进行识别与酶切;2. Buffer的作用是维持
反应体系
的酸碱度的稳定。
什么叫做
酶切
星型
反应
答:
双
酶切反应
(Double Digests)1、同步双酶切 同步双酶切是一种省时省力的常用方法。选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步。
NEB
每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer,以保证100%
的酶
活性。NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的...
双
酶切体系
一般怎么优化
答:
这要视酶的最佳
反应
温度而定,一般同步进行时最佳
酶切
-连接时间为4h;预扩增后模板的稀释倍数,不同的试验材料要进行适当的摸索以找到最佳用量,笔者经过不同的试验处理发现初始模板用量为300ng的黄瓜基因组,在预扩增后以稀释30倍为最佳。
NEB
公司的BamHⅠ和KpnⅠ双
酶切体系
怎么设计?
答:
何必两步回收呢 切了一个灭活十分钟 继续切 或者换MBI的酶 它有通用的buffer 用2X的 不过
NEB的酶
是最好的了 没有必要换了
酶切反应
注意事项
答:
一、 建立一个标准
的酶切反应
目前大多数研究者遵循一条规则,即10个单位的内切酶可以切割1μg不同来源和纯度的DNA。通常,一个50μl的
反应体系
中,1μl的酶在1X NEBuffer终浓度及相应温度条件下反应1小时即可降解1μg已纯化好的DNA。如果加入更多的酶,则可相应缩短反应时间;如果减少酶的用量,...
NEB
-T4 DNA Lagase注意事项
答:
推荐DNA浓度(0.1-1µM的5′末端)。使用注意:ATP是反应必须的辅因子。这一点与要求NAD作辅因子的大肠杆菌DNA连接
酶
不同。如在
反应体系
中补加1mM的ATP,连接反应还可以在
NEB
提供的四种限制性内切酶缓冲液(NEBuffers)或在T4DNA多聚核苷酸激酶缓冲液中进行。质量保证:无核酸内、外切酶污染。每批...
限制性内
切酶
与核酸内切酶的区别在哪里?
答:
两者的区别:限制性内
切酶
的主要功能是保护细菌不受噬菌体的感染,而外切酶其水解的最终产物是单个的核苷酸(DNA为dNMP,RNA为NMP)。核酸内切酶(endonuclease):在核酸水解酶中,为可水解分子链内部磷酸二酯键生成寡核苷酸
的酶
,与核酸外切酶相对应。外切酶:即核酸外切酶(exonuclease )核酸外切酶是一...
NEB
内切酶为什么要加入bsa
答:
因为BSA作为一种稳定剂,可以保护
酶切
的载体或者外源片段不易降解。
Takara的NheI 和BamHI双
酶切体系
表中没有双酶切缓冲体系应该如何选用缓 ...
答:
1、如果你用的是Takara的酶,应该就只能分步了,而且BamHI还是30度
反应
,虽然也可以在37度切,但如果是分步切的话还是用30度吧。2、为什么不用
NEB的酶
呢?可以用buffer1或2同时切(好像是,你需要自己再确认下),而且NEB的这两种酶都有HF酶,效率更高,都可以在buffer4中达到100%的效率。以上,...
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