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ligation buffer
ligation
buffer
能高温加热吗
答:
1)10x
LigationBuffer
含有ATP,使用前应在室温放置至融化或用手掌温度辅助融化,然后置于冰上。不要加热融化以免ATP降解。2)T4DNALigase对热敏感,容易失活。使用时请放置冰上,用后立即置冰箱中冷冻保存。3)如需在接反应后灭活T4DNALigase,可于65℃孵育10min即可。
DNA连接酶的分类
答:
10×
LigationBuffer
成分:Tris-HClpH7.8600mMMgCl215mMDTT100mMATP10mM连接条件推荐在10~20ml反应体系中进行接反应,反应中DNA浓度最大可达1mM(1kbDNA约1mg/ml)。首先混合要接的DNA片段,加入10×LigationBuffer至终浓度为1×,再加入适量T4DNALigase混匀。最适连接温度为16℃。粘末端连接效率较高,加入...
PCR产物克隆用pMD19连不上,可以用pGEM-T Easy吗
答:
pMD19-T和pGEM-T Easy没有原理上的差别,当然考虑到可能是载体放久了出问题或者2X的
ligation buffer
出问题之类,还是值得换一下试试看的。另外invitrogen有一种做TA克隆的载体是利用拓扑异构酶的,如果你的PCR产物真的比较难做TA克隆也可以试一下。
T4 DNA连接酶有哪些化学性质
答:
DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的,最初是在大肠杆菌细胞中发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶,借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外),而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶...
DNA
Ligation
: How it Works & 6 Tops Tips
答:
The DNA
ligation
reaction itself has two basic steps:1. 第一步DNA末端必须偶然碰撞,并保持足够长的时间,以便连接酶将它们连接起来。2. 第二步是酶促反应,DNA连接酶通过两步机制催化3 ' -OH与5'-磷酸的连接。首先,附着在酶活性位点赖氨酸残基上的AMP核苷酸被转移到5'-磷酸基上。然后...
限制性内切酶
答:
摘要给你看看你能用到吗?浓度 4~12 U/μl 添付・活性测定
Buffer
K 反応温度 37℃ 活性测定基质 λDNA 起源 Micrococcus varians RFL19
Ligation
-Recutting Test 本酵素对
ligation
效率有影响,线性ligation速度上有影响,环状ligation将变得非常困难 甲基化的影响 不受dcm methylase的影响 ...
T4 DNA连接酶催化的连接反应的能量来源是?
答:
T4 DNA连接酶由一条多肽链组成,分子量为6800,通常催化粘性末端间的连接效率要比催化平末端连接效率为高。催化反应需要Mg2+和ATP,ATP作为反应的能量来源。这个网页介绍了几种DNA连接酶,建议参考一下。不过这个网页已经打不开了,但是可以在百度里搜索上面这个句子,或者我发这个网页快照给你吧。http:/...
shRNA实验步骤
答:
4、吸取5µl 10*DNA loading
buffer
加入PLKO酶切液中。 5、参数设定100V,20min左右(条带跑到胶中间比较合适)。 6、暴光200ms以上,观看条带。 When visualizing DNA fragments to be used for
ligation
, use only long-wavelength UV light. Short wavelength UV light will increa...
建立dna连接体系时应注意什么
答:
1)10x
LigationBuffer
含有ATP,使用前应在室温放置至融化或用手掌温度辅助融化,然后置于冰上。不要加热融化以免ATP降解。2)T4DNALigase对热敏感,容易失活。使用时请放置冰上,用后立即置冰箱中冷冻保存。3)如需在接反应后灭活T4DNALigase,可于65℃孵育10min即可。
DNA连接酶有哪些
答:
T4DNA连接酶是经原核表达,柱层析纯化获得的高纯T4DNA接酶,SDS-PAGE显示为一条62kD的蛋白条带。本品附带10x
LigationBuffer
含有ATP。适用于DNA片断接、克隆等各种反应。热稳定DNA连接酶 热稳定的DNA连接酶(thermostableDNAligase),是从嗜热高温放线菌(Thermoactinomycesthermophilus)菌株中分离纯化的,一...
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