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pcr常见问题总结诶
PCR
实验最
常见
的9个
问题
及解决方案
答:
(6)循环次数过多
;增加模板量减少循环次数至30,缩短退火时间及延伸时间,或改用二种温度的PCR循环。
(7)退火温度过低
。(8)
电泳体系有问题
:①凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大;②凝胶没有凝固好;
③琼脂糖质量差
。(9)若为PCR试剂盒则可能:①由于运输储存不当引起试剂盒失效;②试剂盒...
PCR常见问题
分析(无、非特异、拖尾)
答:
原因:
1.模板不纯2.Buffer不合适3.退火温度偏低4.酶量过多5.dNTP、Mg2+浓度偏高6.循环次数过多对策
:1.纯化模板2.更换Buffer3.适当提高退火温度4.适量用酶5.适当降低dNTP和镁离子的浓度6.减少循环次数 问题4:假阳性现象:空白对照出现目的扩增产物原因:...
PCR
的
问题
答:
引物:引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称,是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因
。有些批号的引物合成质量有问题,两条引物一条浓度高,一条浓度低,造成低效率的不对称扩增。对策为:选定一个好的引物合成单位。引物的浓度不仅要看OD值,更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳,一定要...
求解释这
pcr
是啥
问题
,帮同学问的
答:
PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。
其原因往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低
,
循环次数过多
引起。其对策有:减少酶量,或调换另一来源的酶。②减少dNTP的浓度。适当降低Mg2+浓 度。增加模板量,减少循环次数。
实时荧光定量
PCR
数据分析及
常见问题
分析
答:
一、数据分析基线一、数据分析基线一、数据分析基线一、数据分析基线一、数据分析阈值线一、数据分析阈值线二、
常见问题
分析1、
PCR
扩增抑制(以Bio-CFX96为例)扩增曲线荧光强度大小及Ct值大小可提示存在抑制。H07存在扩增抑制;解决方法:将样本稀释后进行扩增。(抑制物的影响可通过稀释样本消除)二、常见...
pcr
产物片段长度对不上
答:
以下是一些导致此类
问题
的
常见
因素:1、扩增条件设置不当:扩增温度、时间、引物浓度等条件会影响
PCR
反应的特异性和产物长度。仔细检查PCR反应体系并优化扩增条件。2、引物设计问题:PCR引物的序列和浓度会影响PCR反应的特异性和产物长度。使用经过验证的引物序列,并尝试调整引物浓度。3、模板DNA质量问题:...
荧光定量
PCR
疑难解析大本营(一)
答:
在分子生物学领域,聚合酶链式反应(
PCR
)如同一颗璀璨的明珠,而实时荧光定量 PCR 则是其升级版,为定量分析提供了强大的工具。它通过荧光探针或DNA结合染料,实时监测PCR反应进程,精准测量特定DNA或RNA序列的拷贝数。理解并解决实施过程中
常见
的挑战,如引物二聚体、存储
问题
和NTC扩增,是确保高质量数据...
基因扩增技术的实验中
常见问题
对策
答:
PCR
实验中最
常见
的
问题
就是假阴性和假阳性问题。 PCR产物可通过琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,以前者最常用,通过电泳可以判断扩增产物的大小。在临床检测中,仅通过凝胶电泳判断扩增片段大小即可满足检测的需要。通常制胶方法为100mlTBE加1.5g琼脂糖在微波锅内溶解,稍冷后倒入电泳槽。电泳后,用...
PCR
污染的原因是什么
答:
3.)
PCR
扩增产物污染:这是PCR反应中最主要最
常见
的污染
问题
。因为PCR产物拷贝量大(一般为1013 拷贝/ml),远远高于PCR 检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可造成假阳就可形成假阳性。4)容易忽视,最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,在操作...
Real-
PCR
的
问题
答:
说明你的目的基因有丢失的现象。这在转基因试验很
常见
,尤其是高等动物细胞。如果是提DNA做的,说明是基因丢失。如果DNA还在,但是做RT-
PCR
没有结果,说明该基因没有表达,有可能是启动子发生甲基化等。
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