11问答网
所有问题
当前搜索:
western配胶配方
WB蛋白电泳实验步骤,液体的配置及相关问题解答
答:
TBST(10×): Tris 12.1g, NaCl 40g, 500ml ddH2O。2. 实验步骤详解a.
配制
和制胶使用雅酶
配胶
盒,根据样本选择胶浓度:7.5%(30kDa以上)、10%(20-150kDa)、12.5%(50kDa以下)。确保玻璃板清洁,倒入AB液(1:1),加入促凝剂,再加压胶液,静置15分钟以上。 b. 电泳安装胶板,确保电...
western
印迹的步骤
答:
2)按表7.1配制分离胶液体并脱气,然后加入10%的过硫酸铵和TEMED,轻轻搅拌混匀。表7.1 聚丙烯酰胺分离
胶的配制
试剂成分 配制不同浓度分离胶所需试剂(ml)5% 8% 10% 12% 15%Acry:Bis (30:0.8) 2.50 4.00 5.00 6.00 7.504×Tris·Cl/SDS, pH8.8 3.75 3.75 3.75 3.75 3.7...
做好
western
blot需要注意各种细节,转给需要的你!
答:
1.
配制
8ml 10%分离
胶
,依次向小烧杯中加入蒸馏水3.04ml,30%丙烯酰胺2.7ml,1.5M•pH8.8 2.0ml,10%SDS 80ul,10%AP 80ul,TEMED 3.2ul。加入TEMED混匀后立即灌胶,用1ml枪头沿着玻板上沿从左至右轻轻将胶打入,以免胶浓度不均匀,避免气泡产生。加完后换200ml枪头从左至右更加小心加入蒸馏水水封,以免冲散刚...
western
blot实验步骤
答:
裂解液配方:
100ul碧云天裂解液+1ul蛋白酶抑制剂混合物+1ul PMSF 3
)按实验需要准备好细胞:去掉培养基,1×PBS洗3次(去掉培养基中的血清),每个孔(6孔板)加入适量的裂解液。迅速用细胞刮刮下细胞并转移至1.5ml管中,置于冰上20min,振荡混合后,再置冰上10min。2. SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶...
有人有
western
blot的Tris-乙酸胶的
配方
吗?还有相关电泳液的配方?急...
答:
2g)SDS溶于去离子水中,定容至100mL(20mL),加热至68℃助溶。E液——10%过硫酸铵:5g(0.5g)过硫酸铵,溶于50mL(5mL)去离子水中;现配现用或分装至0.5mL离心管中冷冻备用。F液——TEMED(N-N-N`-N`-四甲基乙二胺)原液,室温保存。三、
配制
Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离
胶
所用...
western
blot详细步骤
答:
第二步:
配胶
1、玻璃板对齐后放入夹中卡紧,然后垂直卡在架子上准备灌胶。2、配分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。待胶面升到玻璃板3/4位置时即可。然后胶上加一层水,液封后的胶凝的更快。3、当水和胶之间有一条折射线时,说明胶已凝了。倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。配浓缩胶,...
Western
Blot基本原理及步骤
答:
1、蛋白样品的制备 2、
配胶
根据蛋白的分子质量选择百分比不同的胶。(1)清洗胶板:用清水冲洗胶板,直至胶板表面没有任何污物。(2)验漏:将胶板安装在胶架上,向胶板内注满ddH2O,静置2min,观察是否渗漏。如果渗漏,重新装配胶板胶架。(3)风干、冷却:确定胶板不渗漏后,弃ddH2O,用吹风机吹干...
生物科研实战——
Western
blot
答:
(1)玻璃板装配:将玻璃板擦干净,放入制
胶
器中夹紧 (2)按照
配方配制
不同浓度的分离胶(下层胶)(3)将配置好的分离胶灌入玻璃板夹层,加入异丙醇压平分离胶,待凝固,一段时间后,分离胶与异丙醇出现明显的分界线,提示上层胶完全凝固。(4)倒出上层异丙醇,用滤纸吸干残余的异丙醇 (5)...
western
-blot实验步骤
答:
Western
,也称Western blot、Western blotting、Western印迹,是用抗体检测蛋白的重要方法之一。可按照以下步骤操作。1.收集蛋白样品(Protein sample preparation)使用细胞裂解液,对贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品进行裂解。然后测定每个蛋白样品的蛋白浓度。2. 电泳(Electrophoresis)(1) SDS-PAGE凝
胶配制
SDS-PAG...
western
blot
配胶
时为什么上层胶会断裂
答:
一、
配胶
注意一定要将玻璃板洗净,最后用ddH2O冲洗,将与胶接触的一面向下倾斜置于干净的纸巾晾干。分离胶及浓缩胶均可事先配好(除AP及TEMED外),过滤后作为储存液避光存放于4度,可至少存放1个月,临用前取出室温平衡(否则凝胶过程产生的热量会使低温时溶解于储存液中的气体析出而导致气泡,有...
1
2
3
4
5
6
7
8
涓嬩竴椤
其他人还搜
western转膜液配方
WB电泳时跑歪了补救
western分离胶配方
wb上层胶和下层胶的配制
WB转膜液配方
western浓缩胶配方
WB配胶比例
WB电泳缓冲液
wb下层胶有很多特别小的气泡