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westernblot原理及步骤
什么是
Westernblot
法及Westernblot法目标?
答:
是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中时常会用到的一种实验方法。其基本
原理
是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
westernblotting
转膜是根据什么
原理
答:
蛋白质印迹(免疫印迹试验)即
Western Blot
物、物化免疫遗传用种实验其基本
原理
通特异性抗体凝胶电泳处理细胞或物组织品进行着色通析着色位置着色深度获特定蛋白质所析细胞或组织表达情况信息 蛋白质印迹由瑞士米歇尔弗雷德希物研究所(Friedrich Miescher Institute)Harry Towbin1979提尼尔·伯奈特(Neal Burnette)...
做
western blot
的一抗孵育的
原理
是什么啊?
答:
在sds-page电泳前,一般样品加入上样缓冲液中并煮沸5~10分钟,让蛋白样品变性并带上一定电荷,使蛋白迁移速度只与分子量相关,这样才能将不同的蛋白通过电泳尽量的区分开来。这个过程中,会打断一些分子间的相互作用,包括抗体和蛋白样品间的相互作用,也许是没人这么做的原因。
western blot
实验中加样的具体
步骤
?
答:
阳性对照、阴性对照、你的样品。如果同时做两块胶,其中一块用来做染色的话,最好加上marker。除了marker,其他的样都要加等量的上样缓冲液。
western blot
中的RT是什么意思?
答:
Western免疫印迹(
Western Blot
)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。它需要利用放射性同位素指示剂进行示踪,所以RT就是Radioisotope Tracer放射性示踪物。
wb蛋白煮样温度
答:
wb蛋白煮样温度为100摄氏度。
westernblot
实验中,研究纯化的蛋白,用100摄氏度,煮5min,若研究细胞样品的膜蛋白,用膜蛋白抽提试剂盒做目的蛋白的富集,用100摄氏度,煮5min。WB,蛋白质印迹又称免疫印迹,是采用印迹技术将蛋白质转移到膜上,根据抗原-抗体的特异性结合,检测复杂样品中的某种蛋白的方法...
免疫组化和
westernblot
验证蛋白质上有什么区别
答:
免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。 所以免疫组化在组织定位和定性上比较准确,但是在定量上不够准确。
western blot
也是利用抗体和抗原...
Westernblot
法的Westernblot法简介
答:
是美国斯坦福大学的乔治·斯塔克发明的,
Western Blot
法的名字就由发明者Southern与印迹的对象DNA相结合得出的Southern blot。后来又出现了两个过程相似但对象不同的印迹方法,一个针对RNA,一个针对蛋白质,这两种技术分别被称为Northern和Western,Western Blot法的叫法最终被确定下来。
western blot
湿转时,用恒压还是恒流,条件是多少
答:
蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即
Western Blot
。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本
原理
是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。蛋白质印迹的发明者一般认为是美国...
western blot
收样时为什么放在冰上
答:
western blot
一般需要冰浴的
步骤
有 样品处理:比如超声破碎处理时,因为超声破会带来热量的产生,一般需要在冰上或者冰浴处理。主要目的是防止样本处理过程中目的蛋白发生降解 转膜:在转膜的时后因为电流电压的原因,特别是高电流快速转膜时,通常会有非常严重的发热现象。为了中和热量,一般需要在冰上或者冰...
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