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细胞westernblot步骤
westernblot
内参加在哪里
答:
westernblot
内参加在于所有加样的孔道内因为内参是样品组分之一~区别内参与目的蛋白的是其分子量的差异~蛋白处理:此
步骤
是关键,蛋白处理的好否决定结果好坏。取
细胞
,3000rpm 3min离心,加入含蛋白酶抑制剂(现做现加)的细胞裂解液(本实验室选择RIPA,1×106/L细胞对应100ul),枪尖反复吹吸裂解...
western blotting
的
过程
和原理
答:
什么理论
过程
?就是原理呗?
WesternBlot
原理、显色分类及操作
步骤
一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持...
什么是
Westernblot
法及Westernblot法应用
答:
Westernblot
法应用:Westernblot法应用分子生物学、生物化学和免疫遗传学中时常会用到的一种实验方法,并且是一种能对蛋白进行定性和半定量的分析方法。是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的
细胞
或生物组织样品进行着色,并且通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息...
westernblot
内参GAPDH成功了
视频时间 1:40
如何分离小鼠肝脏非实质
细胞
去做
WesternBlot
答:
分离肝实质
细胞
和肝非实质细胞主要是通过灌流方法分离的。灌流完后,低速离心,沉淀为实质细胞,上清为非实质细胞,收集上清就可以获得非实质细胞,在低速离心1-2次就可以分离获得比较纯净的非实质细胞了
三种印迹技术的原理及区别
答:
三种印迹技术的原理及区别:印记技术是指将在凝胶中别离的生物大分子转移或直接放在固定化介质上并加以检测分析的技术。它主要包括 DNA 印迹技术 (Southern blot) 、 RNA 印迹技术 (Northern blot) 和蛋白质印迹技术 (
Western blot
) 等。原理:当模板分子(印迹分子)与聚合物单体接触时会形成多重作用点...
westernblot步骤
蛋白样品制备 为什么裂解液前加入pbs
答:
pbs是为清洗
细胞
等~裂解前需要离心除去~裂解时不能加pbs~pbs会稀释裂解液影响裂解效率~
转染转染
细胞
筛选
答:
有限稀释法:将
细胞
消化后进行10次连续稀释,将每个稀释度的细胞分别接种于96孔板,7-10天后选择单个克隆生长的孔进行再次克隆。筛选出的单克隆细胞,通过ELISA或
Western blot
技术检测外源蛋白的表达情况。考虑到不同克隆的表达差异,可以选择表达量最高的克隆进行传代并保存,以满足后续研究需求。
试述如何应用2D-PAGE进行差异蛋白质组学的研究,并分析其优缺点。_百...
答:
3、对2D凝胶进行染色处理(可选择各种染色方法),利用软件分析比较成对组织的2D结果,找到上调或下调的蛋白质点。4、将有差异的蛋白质点切割下来进行质谱分析,质谱谱图通过查询数据库找得蛋白质点对应的蛋白质。5、对于得到的有差异的蛋白质要进一步进行验证,常用的手段包括:
WesternBlot
,RT-PCR,免疫...
艾滋病检测方法,艾滋病检测方法都有哪些?
答:
ELISA用去污剂裂解HⅣ或感染
细胞
液提取物作抗原,IFA用感染细胞涂片作抗原进行抗体检测,如果发现阳性标本应重复一次。为防止假阳性,可做
Westernblot
(WB,蛋白印迹法)进一步确证。WB法是用聚丙烯酰胺凝胶电泳将HⅣ蛋白进行分离,再经传移电泳将不同蛋白条 带转移于硝酸纤维膜上,加入病人血清孵育后,用抗...
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