RNA的浓度和A260/A280的比值是什么关系

Question

如题所述

Answer 1

RNA的浓度和A260/A280的比值呈正相关。

一般来说OD260代表核酸的吸光度，OD280代表蛋白质的吸光度。 A260/A280与OD260/OD280的意思是一样的。A代表吸光值，而OD是光密度值，二者含义一样。

蛋白中trp、tyr、phe的吸光度为280nm，所以280nm常用来表示蛋白质吸光度；而260nm为DNA的吸光度。

理论上，纯的RNA情况下：OD260/OD280的值为2，纯的DNA情况下：OD260/OD280的值为1.8.

OD260反映的是溶液中核酸的浓度，OD280反映的是溶液中蛋白质或者氨基酸的浓度。样品中如果含有蛋白质及苯酚，A260/A280比值会明显下降。对于纯的样品只要读出260 nm 的A值即可以算出含量。通常以A值为1相当于50微克/ml 双螺旋DNA，或者40微克/ml 单链DNA（RNA），或者20微克/ml 寡核苷酸计算。

①OD260/OD280=1.9~2.0 RNA居多，纯度已经很高了。

②纯DNA：OD260/OD280≈1.8(>1.9，表明有RNA污染；<1.6，表明有蛋白质、酚等污染）

③纯RNA：1.7 <OD260/OD280<2.0（2.0时表明可能有异硫氰酸残存）

Answer 2

RNA的浓度和A260/A280的比值呈正相关。

A260nm
是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围，稀释或浓缩样品，使之在此范围内；如果吸光度小于0.05，检查是否存在操作因素（如移液不准确，样品内有悬浮物等）影响。DNA样品的A260 吸光度值是否>0.1。（请注意，这个值跟仪器无关，核酸的吸光度必需大于0.1，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值<0.1）。

A 吸光值
I0 入射光强度
I 投射光强度
c 吸光物质的摩尔浓度（mol/L）
d 光通过的液层厚度（cm）
ε 摩尔吸光系数（Lmol-1cm-1）

A280nm
是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯RNA为2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。比值=1.5相当于50％蛋白质/DNA溶液

A260/A280

是核酸纯度的指示值，纯度好的DNA，在pH7-8.5 下其比值应该在2.0 或2.5，A260 / A280的比值， 用于评估样品的纯度， 因为蛋白的吸收峰是280 nm。 纯净的样品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。

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