影响生化检测的常见因素分析
除疾病之外,还有许多因素也可影响生化检测的结果。这些因素可能在分析过程的前中后。下面是我为大家带来的关于影响生化检测的常见因素分析的知识,欢迎阅读。
分析前因素
分析前因素与病患本身,样本收集,样本处理等因素相关,这些因素通常会影响到分析前体液样本的组成。包括以下几个方面:
生物因素:病患与生具来的且可被控制的因素。
非生物学因素:包括样本收集,处理,储存,抗凝剂的使用。
分析中因素
分析中因素是能够影响分析程序的因素。
干扰因素:脂血症,溶血,黄疸,高蛋白血症,药物。以及其他更多情况。
质量控制:确保测试操作和结果的准确性。
分析后因素涉及到实验室数据呈现、存储和传递给临床医生的不同方式。
只要有可能,尽量控制以上三类因素,减少对实验结果的影响。
1、分析前因素
在实验室分析样品之前,分析前因素影响样品的组成(因此也将影响样品质量)。
这些因素是实验室分析中最重要和最常见的误差来源,却常在分析实验数据时被忽略。
应该尽量控制这些因素,减少对实验结果的影响。控制分析前因素包括兽医或技师进行样本的充分采集,准备和处理。当然也存在一些不能被控制的因素,例如评估疾病引起的结果时,必须考虑并识别物种的遗传性生理差异。
分析前因素包括生物性和非生物性因素。
1.1 生物性因素
某些因素是动物固有的,例如品种,年龄,和性别。但在评估检测结果时需考虑。记住,实验室提供的绝大多数的参考值适用于健康的成年动物。兽医可以控制其他生理性因素,例如当准备血液样本时,确保动物已禁食12小时。
1.1.1 固有的生物性因素
物种:物种特异性导致分析来源和分析结果都存在显著差异。例如丙氨酸氨基转移酶是小动物而不是大动物的肝特异性酶。因此,必须将动物的生化结果与相同物种的参考区间进行比较,例如,不能使用马的参考区间来分析驴的生化结果。
品种:生化分析中存在与品种相关的差异,但这些差异通常较小。健康驮马比纯种良马通常肌酸激酶值更高。
年龄:许多生化分析成分随年龄而变化,幼畜生化结果经常有变化,但不是因为疾病,而是与年龄有关,比如所有动物幼畜的碱性磷酸酶都偏高。一般来说,由临床病理学实验室提供的大多数参考范围多通过成年动物确定,不太适用于幼龄动物。
性别:雌性动物怀孕或哺乳相关的生理状态,可在非疾病状态下影响分析结果。在一些物种中,可能存在不同性别的单独参考区间,例如,人体内的血清铁。一般来说,家畜几乎没有与性别相关的检测偏差。
1.1.2 可控的生物性因素
样本采集技术的标准化可以使这些因素对生化检测结果的影响最小化。如果这些因素是不可避免的或被需要的(例如,在运动后采集样品以检测马中的横纹肌溶解症),结果分析期间必须考虑这些因素。
近期食物摄入:这将导致餐后脂血。脂血可能影响某些血浆成分的测量分析方法,从而导致结果无效。可以通过禁食12小时收集适当的'样品来避免餐后脂血。事实上,禁食后脂血升高是继发于疾病的脂质异常代谢的有利证据。
最近的进食可能影响与脂血症无关的某些血浆成分浓度,例如葡萄糖。这种效应因为食物代谢的差异(例如非反刍与反刍动物相比)存在明显的物种依赖性。
应激:应激(继发于动物处理或潜在疾病)将对实验室结果产生较大影响。应对幼龄或未驯化动物的应激尤为重要,在采集血液样本时应可能降低动物应激。
运动:运动对于血浆成分的影响取决于运动的类型和强度。一般而言,应该在动物运动之前进行血液样本的采集。
药物:给药方式,例如肌肉内给药将直接影响分析结果。药物本身也可干扰被分析物的测量。
1.1.3 药物干扰
可分成两大类:药物的生理作用(体内)或代谢物对被分析物的影响
在体外,药物及其代谢物的某些物理或化学性质也会干扰实际检测过程。对检测能产生显著干扰的治疗药物是血红蛋白类氧载体(HBOC),例如血液增强剂Oxyglobin。它是从牛血清中发现的一种呈黑红色的聚合血红蛋白。因为这种化合物的固有颜色,Oxyglobin在治疗贫血动物可造成相同于血浆/血清溶血的情况。它在血液学,生化和尿检的结果中都产生了明显的干扰,在生化检测中的干扰取决于检测方式和仪器的使用。制造商正在努力开发新的方法来补偿或消除来自HBOCs的干扰,因此未来可能在给予HBOCs的动物中也能获得精确的检测结果。这提示我们血液样品应在给予贫血动物HBOC之前收集,以尽量减少对检测结果的影响。
实验室应该被告知任何治疗药物的使用,以此可采取措施降低药物造成的影响。然而,兽医学中关于药物对动物或分析技术有哪些影响还了解甚少,除了例如皮质类固醇,溴化物的例子。所以,任何异常的生化检测结果应该结合动物完全的用药史分析。
1.2 非生理性因素
非生理因素包括样本采集,处理和运输。应尽量控制这些因素以减少对实验室结果的影响。
1.2.1 样本采集
静脉穿刺:清洁的静脉穿刺是减少人为误差的重要条件之一。错误的静脉穿刺技术可能引起溶血,从而通过多种方式导致检测结果产生误差。例如高钾红细胞将导致钾假性升高,红细胞中AST导致AST假性升高(比如猫),检测过程中化学反应释放相关成分导致CK假性增高。止血试验中错误的静脉穿刺产生的组织因子将污染样品,导致样品管中的沉淀凝血,以无法预知的方式延长或缩短凝血时间测定。可通过将血液直接收集到柠檬酸盐抗凝血剂(预填充注射器或直接进入真空采血管)中减少误差影响。
抗凝剂:抗凝剂将影响检测结果。
血液检测:最好使用EDTA抗凝血剂,柠檬酸盐将稀释样本,肝素将引起细胞凝集,两者都将减少计数。
生化检测:肝素化血浆或血清(无抗凝血剂)样品适用于生化检测。因为同一患者的血浆与血清的检测结果不同。所以如果需要连续监测同一患者,应使用相同的样品。血浆里含有纤维蛋白原,而血清中没有(在凝血期间移除),因此检测结果里血浆的总蛋白(和球蛋白,因为纤维蛋白原是β球蛋白)的结果比血清高。凝血期间钾从血小板中释放,因此血清钾高于血浆钾(后者结果更准确)。氟化物-草酸盐抗凝剂可用于葡萄糖的测量,它会抑制细胞代谢,应马上将血清/血浆从细胞分离,因为该抗凝血剂会诱发严重的溶血。柠檬酸盐和EDTA抗凝剂不适用于生化检测,因为它们会螯合二价阳离子(钙,镁)并含有高浓度的钠(柠檬酸盐)或钾(EDTA)。即使是在轻度EDTA污染的血液样品中进行生化检测都会出现超高钾和超低钙的结果。一些酶的活性也需要二价阳离子。因此,在含有EDTA或柠檬酸盐做抗凝剂的血浆中,这些酶(例如碱性磷酸酶)的检查结果会虚假偏低。
凝血测试:最好使用柠檬酸抗凝剂(对钙有轻度螯合作用,因此钙可以回到样本中以进行凝血筛选测定)。不能使用肝素(样品不会凝结),EDTA可以使用(钙可以回到样本中),但不是很可靠所以不推荐使用。
1.2.2 样本处理和储存
样品收集后,应严格注意样品处理,以尽量减少这些因素对结果的影响。
分离:只要有可能,尤其是当样品收集和实验室送检之间有延迟时,应在样品收集后尽快分离细胞中的血清或血浆。包括使样品凝结(对于血清)和离心样品以分离出血液组分。应该将血清或血浆从细胞中分离并置于新的凝集(无抗凝血剂)管中。管应标记为“血浆”或“血清”。未与细胞分离的样品具有较低的葡萄糖浓度(在储存期间由细胞消耗),即使没有明显的溶血,浓度较高的一些成分,将从红细胞中渗出,例如马血液中的钾。血清分离器(或Corvac)的专用管,材料含有硅胶,可以将血清和凝块分离。即使使用这些管,仍应该取出血清并放置到新的凝血管中,尤其当专用管不是全新状态(硅胶如果裂开也将影响样本)。
标记:患者的所有体液样品应正确标记好患者姓名,标识和样品类型(例如血清,血浆,滑液,腹膜液)。实验室不负责样品的正确标记,可以想象,一个不正确的标签标本将对病人护理产生多么严重和有害的后果。
储存:一般情况下,通常从样品收集到实验室送检之间至少有24小时的延迟。因此,从细胞中快速分离血清/血浆和保持样品冷却(使用冰袋)对于保持酶活性最大化和防止结果出现误差是非常有必要的。如果预计长时间(> 24小时),建议将样品冷冻,并使用干冰将样品运输至实验室。样本存储的方法取决于样本检测类型,一些样品冻结也不是很稳定,所以应该经常向实验室咨询不同样本的储存方法。
2、分析中因素
分析中因素通过影响仪器测量分析物的过程。由于仪器类型的差异,不同实验室会对检测结果产生不同影响。分析因素由样品固有属性引起,例如血脂的干扰,或分析仪本身的固有特征。仪器本身的误差可通过实验室的质量保证程序降至最小化。
干扰
脂血,游离血红蛋白(溶血),黄疸(高胆红素),高球蛋白和药物,这些内源性物质对检测结果的干扰程度取决于仪器类型、检测方法以及样品中的干扰物质数量(即实验室特异性)。在康奈尔大学临床病理学实验室中使用的化学分析仪将测量样品中脂血,溶血和黄疸的含量,并将这些值作为指数,用于评价这三种内源性干扰物质对化学结果的影响程度。
高蛋白血症:单克隆免疫球蛋白(副蛋白),特别是当以高浓度存在时,通过以下机制干扰生化分析:
高粘度:影响样品体积,粘度取决于免疫球蛋白的类别(免疫球蛋白如何形成高粘度,为何形成?)
与被检测物结合:与一些被检测物结合的免疫球蛋白将增加或减少分析成分,例如已经有一例犬慢性淋巴细胞白血病和犬IgM单克隆丙种球蛋白病病例中发现了高磷酸盐血。
体积变化:这类似于脂血症的影响。什么疾病导致单克隆丙种球蛋白病?
药物:给药方式不同的药物干扰可能使结果产生偏差。在兽医学中最常见的药物干扰之一是犬溴化物(抗惊厥药)疗法,检测样品的氯化物值将人为升高。临床兽医应该告知实验室使用在待检动物身上的的任何药物,这有助于减少药物对化学测试的影响(但通常不会消除)。
检测程序
控制和最小化影响测定性能的因素包括质量保障。
临床病理实验室的目标是提供准确和精确的结果。质量保证是通过实施清楚明确的实验室操作规程和质量控制程序来实现。
质量控制程序取决于测量对照血清中被分析物的浓度(同预定的分析物值对比)。通常落在预定(可接受)限度之外的控制值表示程序存在问题。康奈尔大学的临床病理学实验室每天都会对分析仪器进行对照检测。除非对照值在可接受的范围内,否则不对患者样品进行分析。此外,实验室参与外部质量控制计划,分析未知样品时候,会将结果与使用相同仪器的其他实验室的结果进行比较。如果本校实验室的结果与平均值的偏差较大,表明存在程序性问题,应即时纠正。
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