260/230比值的含义是什么?

如题所述

A260nm
是核酸最高吸收峰的吸收波长,最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围,稀释或浓缩样品,使之在此范围内;如果
吸光度小于0.05,检查是否存 在操作因素(如移液不准确,样品内有悬浮物等)影响。

DNA样品的A260 吸光度值是否>0.1。(请注意,这个值跟仪器无关,核酸的吸光度必需大于0.1,其值才有效和可靠,因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常 会对光有一定吸收,其值<0.1)。

A230nm
碳水化合物最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样品纯度评估:纯DNA和 RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物(糖类)、盐类或有机溶剂污染,需要纯化样品。

A230产生负值主要是由 于在很低DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中,需要降低样品的稀释度,A230的负值会被校正。



分光光度计进行核酸定量的注意事项如下

每种核酸的分子构成不一,换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。测试前,选择正确的程序,输入原液和稀释液的体积、空白液和样品液。

分光光度计仪器有一定的准确度和精确度。需要考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值,离子浓度等。在测试时,离子浓度太高,也会导致读数漂移,可以稀释样品。

核酸样品存在一些细小的颗粒,为了减少颗粒对测试结果的影响,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值最好在0.1~1.5A。

样品不能存在气泡,空白液无悬浮物,否则读数漂移剧烈;必须使用相同的比色杯测试空白液和样品,否则浓度差异太大;不能采用窗口磨损的比色杯;样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等。

以上内容参考 百度百科-分光光度计

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