该方法是将含不同浓度CsCl的溶液分层加到离心管中，这样可以加速CsCl梯度的形成，使离心时间减少到6h。
1、 将125gCsCl加到167ml(pH8.0)中，制成CsCl溶液（ρ=1.47g/ml）。
2、 将8ml氯化铯溶液加到Beckman Quick-Seal 离心管（或与其相当的管）中，待用。
3、 如有必要，可酌情用TE(pH8.0)将质粒DNA溶液的体积精确地调到3ml。
4、 在质粒DNA溶液中加入8.4gCsCl,将溶液加温至30℃以促进盐溶解， 小心地混匀溶液直至盐溶解。
5、 称量溶液重量并加入TE(pH8.0)直到溶液重量恰好达13.2g，用天平称量时应注意去除管的重量。
6、 加入0.8ml溴化乙锭溶液（10mg/ml溶于水），快速混匀溶液直至染料均匀地分散，此时溶液瓣体积应大约为7.5ml。小心：溴化乙锭是一咱强诱变剂，并有中度毒性。接触含有该染料的溶液应戴手套。【溴化乙锭贮存液应贮存于避光容器内（如用锡箔完全包裹的瓶子），于室温保存。】
7、 室温下，用Sorvall SS34转头（或与之相当的转法）以8000rpm离心5min，浮在液面上的水垢状浮渣是溴化乙2锭和细菌蛋白所形成的复合物。
8、 将22.86cm的巴期德吸管放入装有CsCl（步骤b制备）的离心管中， 吸头应接触管底。用吸管小心地将步骤g所制备的清亮红色溶液（来自浮渣之下）加入管内，使样本层位于CsCl溶液（1.47g/ml）之下。如有必要，可酌情将步骤a中制备的CsCl溶液（ρ=1.47g/ml)添满离心管，封口。
9、 将封口的管，（与相应的平衡管一起）放入Beckman Ti70. 1 或Sorvall65.13转头（或与之相当的转头中），于20℃以60 000rpm度离心6h。
10、 回收闭环质粒DNA区带。
从经过纯化的质粒DNA中去除溴化乙锭
溴化乙锭是一种强诱变剂，并有中度毒性。接触含有该染料的溶液应戴手套。
