第1个回答 2020-10-02
紫外吸收检测DNA浓度与纯度2007年11月13日 星期二 11:40目的： 了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理,掌握测定方法. 原理： 核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链 寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值 （OD260/OD280）,估计核酸的纯度.纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0.若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除 尽,若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低.270nm存在高吸收表明有酚的干扰. 紫外分光光度法只能用于测定浓度 大于0.25μg/ml的核酸溶液,对浓度更小的样品,可采用荧光分光光度法. 试剂与仪器： 提取的质粒DNA,紫外分光光度仪. 操作步骤： 1) 分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零. 2) 取质粒DNA样品2μl,用水稀释100倍,转入分光光度计的石英比色杯中. 3) 在260nm和280nm分别读出样品光密度值.如果样品浓度单位为μg/μl,则样品DNA浓度为OD 值的10倍,即如 OD260=0.1,则样品浓度即为1μg/μl. 4) 若OD260/OD280大于1.8,说明仍有RNA,可以考虑用RNA酶处理样品,若小于1.8,说 明样品中含有蛋白质或酚,应再用酚/氯仿抽提,以乙醇沉淀纯化DNA.