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农杆菌介导转化具体步骤
农杆菌介导转化
法
的
导转化法
答:
农杆菌介导转化过程主要分为两步:
首先:农杆菌将T-DNA以单链的形式从Ti质粒上切下,然后与一系列Vir蛋白接个
,这些过程都发生在农杆菌细胞内;然后:与T-DNA相连的virE2蛋白上有核定位序列,在它的作用下,T-DNA被转入宿主细胞,然后整合宿主基因组,整合的方式主要有双链打开修复和单链缺口修复两种...
转基因植物
的转化
方法
答:
①
农杆菌介导转化
法:利用农杆菌的Ti质粒作为载体,其中T-DNA区段能够整合进植物受体细胞,而Vir区段编码质粒转移所需的蛋白质。将外源基因克隆到大肠杆菌质粒上,再转入不含T-DNA的农杆菌中,通过同源重组整合外源基因到Ti质粒上,最后通过农杆菌转化植物细胞,实现外源基因的转移和整合。② 直接转化法...
根癌
农杆菌
Ti质粒
介导的
植物基因
转化
有哪些方法?
答:
目前已建立了多种根癌农杆菌Ti质粒介导的植物基因转化方法,
主要包括:(1)叶盘转化法:叶盘转化法(leaf:dish:transformation)是Monsanto公司Morsch等人
(1985)建立起来的一种转化方法,其操作步骤为:首先用打孔器从消毒叶片上取下直径为25mm圆形叶片,即叶盘。再将叶盘放入培养至对数生长期的根癌农...
农杆菌介导
外源基因导入烟草的原理的方法是什么
答:
农杆菌可以感染受伤的植物细胞,
通过基因转化把T-DNA上的外源基因导入植物细胞并整合到受体细胞核基因组上
。这些外源基因在植物细胞中得到表达。 二、 操作步骤 1. 农杆菌准备 2. 外植体的准备(愈伤组织、悬浮细胞系、幼嫩茎段或叶片); 3. 用 MS-AS液体培养基稀释原菌液15倍(1.5ml / 20ml)...
农杆菌介导
法
的
过程
答:
③转移DNA上的毒粒基因被激活并表达,同时形成转移DNA的中间体
。④转移DNA进入植物细胞,并整合到植物细胞基因组中。因为单子叶植物不是农杆菌的天然寄主,况且其不能合成起诱导作用的信号分子,所以限制了农杆菌介导法在单子叶植物中的应用。不过近年来大量成功转化的实例表明,植物、真菌、哺乳动物甚至...
植物转基因的过程
答:
1、
农杆菌介导转化
法:该方法涉及将目标基因插入到经过修饰的Ti质粒的T-DNA区域。农杆菌感染植物细胞后,T-DNA被转移到细胞染色体中,从而实现外源基因的整合。通过细胞和组织培养技术,可以再生出含有目标基因的转基因植株。2、基因枪介导转化法:这种方法使用高压气体或者爆炸物来加速微小金属颗粒,这些颗粒...
转基因技术
的转化
方法
答:
1. 遗传转化方法分为两大类,一类需要通过组织培养再生植株,常用的有
农杆菌介导转化
法和基因枪法;另一类不需要通过组织培养,
主要
方法是花粉管通道法。2. 农杆菌介导转化法利用农杆菌的趋化性感染植物受伤部位,并诱导产生冠瘿瘤或发状根。农杆菌中的Ti质粒和Ri质粒含有T-DNA,可将外源基因插入植物基因...
土壤
农杆菌
侵染植物
的具体
过程是怎样的?
答:
农杆菌介导
法的
基本步骤
是:(1)诱导目标植物外植体;(2)构建含有目的基因的质粒;(3)质粒导人合适的农杆菌菌株中及该菌株的活化过程;(4)植物愈伤组织的微伤口处理及农杆菌侵染;(5)共培养及脱菌处理;(6)愈伤组织筛选、分化与植株再生;(7)再生植株及其后代的外源基因及其表达产物的分子检测;(7)...
试述
农杆菌介导的
植物遗传
转化
中外植体培养
主要
有哪些阶段
答:
3.
农杆菌的
培养 在
转化
平板上挑取单菌落在1ml农杆菌培养基中培养。在50ml农杆菌培养基(含相应抗生素(antibiotic))中加入1ml上述培养物,200rpm,28℃培养5-6hr至OD600为0.6-1.0,培养结束前2hr加入乙酰丁香酮(AS,终浓度100uM)。取上述菌液在室温下,4000rpm,10min,弃上清,加入MS液体培养...
如何给植物转基因?
答:
农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中,自从技术瓶颈被打破之后,
农杆菌介导转化
在单子叶植物中也得到了广泛应用,其中水稻已经被当作模式植物进行研究。花粉管通道法 在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液,利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道,将外源DNA导入受精卵细胞,并进一步地被整合到受体...
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