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细胞内蛋白质定位实验
检验一种
蛋白质
在
细胞中
的
定位实验
方法及步骤 哪位博学的好心人帮忙解...
答:
步骤 1、提取纯化该蛋白(提取及纯化
蛋白质
的方法生化上有讲到)2、制取该蛋白的特异性抗体 (将提取的蛋白质注入小鼠体内,使它产生免疫反应,产生特异性抗体,然后提取小鼠血清,血清
中
含有相应抗体)3、将抗体与荧光分子(如GFP),辣根过氧化物酶(HRP)等标记物连接 4、标记抗体与组织切片标本孵育,...
蛋白质
在
细胞内
的
定位
方法?方法和原理
答:
具体原理是:1,western杂交印记是将待测
蛋白质
作为抗原,侵染免疫
细胞
后获得抗体 2,将抗体制作为探针,加荧光标记后将抗体注入细胞,进行放射自显影,从而定位该蛋白质。 (注:放射自显影技术是应用感光乳胶对放射性元素放出的射线的感光性从而对被标记的物质进行观察)...
如何利用激光共聚焦显微镜进行
胞内蛋白定位
答:
要用一个线粒体特异性的探针或者线粒体特异性
定位
的
蛋白
做免疫荧光以标记线粒体的位置,再以一种不同颜色的二抗标记目的蛋白,最后观察两种荧光的叠加情况.如果需要更精确的可以分离线粒体后用western blot检测.如果想用形态学方法建议共聚焦或者免疫电镜,选一种吧,但是看过很多线粒体的文章,用共聚焦的...
怎样观察
细胞内蛋白质
的位置?
答:
由于膜的流动性,淬灭区域的亮度逐渐增加,最后恢复到与周围的荧光强度相等。根据荧光恢复的程度以及变化可看出膜蛋白运动的过程并且能推算蛋白移动的速度。可以用荧光显微镜观察。别的地方的
蛋白质
可以用类似的方法但是可能用别的进行标记。你可以从细胞生物学
里面
找到 ...
蛋白质
的活
细胞内定位
有哪些方法
答:
1.对活细胞和组织或细胞组织切片进行连续断层扫描,能获得精细的单个细胞或一群细胞或所观察的局部组织的各个层面结构(包括细胞特异结构-如细胞骨架、染色体、细胞器和细胞膜系统,样品的深层结构)和完整的3D图像;2.
细胞内
离子荧光标记,单标记、双标记或三标记,甚更高多重标记,检测细胞内如pH和钠...
蛋白质
在
细胞中
的
定位
答:
免疫荧光可以达到目的了。免疫组化可以看出
蛋白
在
细胞
核、细胞浆或细胞间
质
。如果要
定位
到比较大细胞器可能需要免疫荧光,用特异蛋白抗体和细胞器抗体共染;在特殊显微镜比如激光共聚焦显微镜应该是可以看到的。不知道你的探针法是什么探针,如果是RNA探针,达不到定位的效果,因为检测mRNA都是胞浆
中
。
如何证实
细胞
膜上两个
蛋白
的位置关系
答:
证实两个
蛋白
在
细胞
膜上都有
定位
有许多种方法:1,荧光报告基因:两个蛋白各自用荧光蛋白标记,比如GFP和RFP等,两者荧光光谱不可重叠,在共聚焦显微镜下在各自通道观察和merge后的图像分析,可见荧光重叠,即可证明共定位。2,免疫荧光:要求两个蛋白都有抗体,或者带有不同的标签,如myc,flag等,然后用...
如何
定位细胞质中
表达
蛋白
答:
免疫荧光可以达到目的了.免疫组化可以看出
蛋白
在
细胞
核、细胞浆或细胞间
质
.如果要
定位
到比较大细胞器可能需要免疫荧光,用特异蛋白抗体和细胞器抗体共染;在特殊显微镜比如激光共聚焦显微镜应该是可以看到的.不知道你的探针法是什么探针,如果是RNA探针,达不到定位的效果,因为检测mRNA都是胞浆
中
.
为了
定位
某种特异
蛋白
在
细胞中
的含量或者分布,可以采取什么方法?_百度...
答:
免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织
细胞内
抗原(多肽和
蛋白质
),对其进行
定位
、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(...
DNA与
蛋白质
相互作用的研究方法有哪些
答:
(1) 利用有色荧光蛋白标记技术进行
蛋白定位
研究 此法也可称为活
细胞定位
.把两种具有相互作用的蛋白分别克隆到带有两种不同颜色荧光 蛋白(绿色荧光蛋白或红色荧光蛋白)的载体中,共转染到功能
细胞中
(一般选用 COS7 细胞)表达带有荧光的融合蛋白.这样,相互作用的两种蛋白就被标上不同的荧光,可以在...
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