所谓生理指标测定就是从蜜源植物生理学的角度，以蜜源植物休眠期枝条为材料，通过蒽酮比色法、凯氏定氮法等测定蜜源植物休眠期可溶性糖、淀粉、总糖、蛋白质、C/N等生理指标，并结合来年蜜源植物花期测定的花蜜含糖量，分析休眠期该植物的营养生理指标与来年开花花蜜含糖量间的关系，同时，结合气候条件预测来年该蜜源植物的开花泌蜜情况。下面，仅以对刺槐生理指标的测定为例，说明该方法的主要内容。
（1）实验材料。分别在北京香山蜜蜂研究所附近，河北省农科院试验站附近及大连市劳动公园附近选取树龄、长势、生境条件基本一致的刺槐（Robinia pseudoacacia L.）各5棵，分别在树上以阿拉伯数字1～5标记。在1994年、1995年及1996年12月底分别对处于休眠期的上述3个点的标记刺槐取样。采集的枝条分别编号装袋，置于60～75℃烘箱中烘干，恒重待测。由于受篇幅限制，在此仅以北京地区测得数据为例。
（2）实验方法
刺槐休眠期生理指标测定：将烘干后的枝条研磨至碎，35目过筛，弃去粗渣，筛后的粉末为下述实验之材料。
刺槐枝条内糖与淀粉含量的测定用蒽酮比色法。
实验步骤：
①取磨碎的刺槐枝条粉末100毫克于10毫升的离心管中，加入10毫升80%乙醇，搅拌均匀后置于80～85℃水浴中保温30分钟，冷却后离心，将上清液倒入小烧杯中，重复一次，保留残渣。
②将上述提取液置于85℃水浴中使绝大部分酒精蒸发至2～3毫升，用蒸馏水定容至50毫升，然后测定提取液中的糖。
③将上述磨碎组织的残渣于80℃的烘箱中烘干，烘干的残渣转至试管中，加入2毫升蒸馏水，置沸水中加热15分钟，不时加以搅拌，冷却后，加2毫升9.2摩尔/升过氯酸，不断搅拌，持续10分钟，然后加蒸馏水至约10毫升，进行离心。
④倾出上层液于小烧杯中，加2毫升4.6摩尔/升过氯酸于残渣中，搅拌10分钟，加蒸馏水至10毫升，离心，倾出上层液于小烧杯中，定容至50毫升，分析提取液中的淀粉。
⑤配制1×10－6、100×10－6、200×10－6、400×10－6、600×10－6葡萄糖梯度标准液各10毫升，待用。
⑥分别取1、4的待测液1毫升于试管中，加入0.4%蒽酮硫酸试剂6毫升，搅匀，约5分钟在波长650纳米处用721分光光度计测定光密度。
按同样方法测定梯度标准液的光密度，并绘制标准曲线。
根据待测液的消光在标准曲线上分别查出其相应的浓度C（×10－6），按下式计算出刺槐枝条中糖与淀粉的含量。
糖（或淀粉）含量（%）＝｛C×500/1000000｝×100%
每个样本重复测定一次。
刺槐枝条中蛋白质的测定——微量凯氏（Micro-Kieldahl）定氮法。
样品中蛋白质含量（克%）＝[（A－B）×0.0100×14×6.25/C×1000]×100式中，A为滴定样品用去的盐酸平均毫升数；B为滴定空白用去的盐酸平均毫升数；C为称量样品的克数；0.0100为盐酸的摩尔浓度，14为氮的原子量；6.25为系数。
准确称取0.100克刺槐枝条粉末，加入约4毫升的浓硫酸和约400毫克硫酸铜、硫酸钾混合物，在红外消化炉中消化约1小时，消化物转入凯氏定氮仪中加15毫升40%NaOH蒸馏5分钟，以硼酸吸收放出的氨，再用标准盐酸滴定。
上述实验以蒸馏水为对照，整个操作重复一次。
刺槐花期花蜜含糖量的测定：北京地区刺槐花期一般为5月上旬至5月中旬，约一个多星期。我们分别于1995年、1996年和1997年刺槐花期，在测定花蜜含糖量的前一天，用纱网将要测的花朵罩住，以防止花蜜被蜜蜂采集。每日从上午7时开始，每隔2小时测量一次样本树的花蜜，直至下午5时结束。每棵树每次分别测定30朵花，用定量滤纸吸取花蜜。测完的滤纸分别放入已编好号的试管中待测。测量工作从开花有蜜时起，直至花瓣由白转黄，无蜜或几乎无蜜时为止。
实验方法：将已编好号的含有花蜜的试管，加入少许蒸馏水，分10次将花蜜洗出，定容于50毫升的容量瓶中，稀释10倍后待测。
用蒽酮比色测定花蜜中的含糖量。为了便于计算，在下列表中已将30朵花的花蜜含糖量换算成100朵花的花蜜含糖量。
（3）实验结果
①北京刺槐休眠期各营养指标分析结果见表3、表4。
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表3 北京刺槐枝条休眠期营养含量测定结果
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表3 北京刺槐枝条休眠期营养含量测定结果（续）-1
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表4 北京刺槐枝条休眠期营养含量平均值
从表4 中可以看出，可溶性糖含量 1995年最高，1996年次之，1994年最低；淀粉含量 1996 年最高，1995 年次之，1994年最低；蛋白质含量 1994 年最高，1996年次之，1995年最低；C/N 则 1995年最高，1996年次之，1994年最低。
②北京刺槐花期一天中花蜜浓度随时间的变化情况见表5及图55。
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表5 北京刺槐花期不同时间花蜜含糖量平均值
我们可以看出一个趋势，即早晨花蜜浓度较低，11时以后逐渐升高，17时开始逐渐降低。
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图55 花蜜含糖量随时间变化图
③北京刺槐 1994，1995， 1996年三年间各营养指标间差异显著性检验结果，见表6、表7、表8。
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表6 北京1994年和1995年刺槐各生理指标间差异显著性检验
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表7 北京1994年和1996年刺槐各生理指标差异显著性检验
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表8 北京1995年和1996年刺槐各生理指标差异显著性检验
通过统计分析表明，1994年与1995年花蜜含糖量存在极显著差异；淀粉含量也存在极显著差异；C/N间差异显著，即1995年花蜜含糖量、淀粉含量及C/N明显高于1994年。1996年与1994年间花蜜含糖量间差异极显著；淀粉间差异显著，即1996年花蜜含糖量及淀粉含量明显高于1994年。1995年与1996年花蜜含糖量间差异显著，即1995年花蜜含糖量显著高于1996年。
④1995、1996、1997 三年中北京刺槐花蜜含糖量与各营养指标间相关关系的分析结果，见表9，其回归直线图见图56。
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表9 北京1995年、1996年、1997年三年间刺槐花期花蜜含糖量与其休眠期生理指标间相关关系
经统计分析，可以看出（1）刺槐休眠期总糖含量与花蜜含糖量间相关关系显著，P＜0.05，呈正相关。即休眠期枝条总糖含量越高，来年花蜜含糖量就越高。（2）刺槐休眠期枝条淀粉含量与来年花蜜含糖量间相关关系显著，P＜0.05，呈正相关，即休眠期枝条中淀粉含量越高，来年花蜜含糖量就越高。（3）刺槐休眠期枝条中可溶性糖、蛋白质含量及C/N与来年花蜜含糖量间相关关系不显著，P＞0.05，即休眠期刺槐枝条中可溶性糖、蛋白质含量及C/N的高低对来年花蜜含糖量无直接明显影响；但花蜜含糖量与蛋白质含量呈负相关。
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图56 花蜜含糖量与枝条淀粉及总糖含量的回归直线图
⑤北京刺槐花蜜含糖量在不同年份，不同树号的平均值，见表 10、表 1 1、表 12。
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表10 北京1995年度花蜜百朵花泌蜜指标（克）
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表11 北京1996年度花蜜百朵花泌蜜指标（克）
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表12 北京1997年度花蜜100朵花泌蜜指标（克）
从表 10、表 11、表 12 中可以看出，1996年度刺槐花平均含糖量最高，1997年次之，1995年最低。
⑥1995年，1996年和 1997年三年中北京刺槐花期各棵树不同年份间花蜜含糖量差异显著性检验分析记及日泌蜜情况，见表13、表 14、表 15、表 16、表 17、表 18。
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表13 北京1995年刺槐日泌蜜情况（100朵花平均值计）（克）
注：表中**表示未测定。
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表14 北京1996年刺槐日泌蜜情况（100朵花平均值计）（克）
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表15 北京1997年刺槐日泌蜜情况（100朵花平均值计）（克）
注：表中**表示未测定。
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表16 北京1995年、1996年两年间各棵树花蜜含糖量差异显著性检验
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表17 北京1996年、1997年两年间各棵树花蜜含糖量差异显著性检验
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表18 北京1995年、1997年两年间各棵树花蜜含糖量差异显著性检验
从表 16、表 17、表 18 中可以看出，19 9 5年和 19 9 6 年刺槐花期花蜜含糖量各棵树都有显著和极显著的差异，即 19 9 6年各棵树的花蜜含糖量分别显著或极显著地高于1995年。1996年和1997年两年间刺槐花期花蜜含糖量各棵树差异程度不同，1号树差异显著，P＜0.01；4号树差异不显著。这说明1996年1号树花蜜含糖量显著高于1997年；2号树，3号树及5号树花蜜含糖量极显著地高于1997年；而4号树花蜜含糖量则差异不显著。1995年和1997年两年间刺槐花期花蜜含糖量各棵树都有极显著的差异，即1997年各棵树花蜜含糖量都极显著地高于1995年。
（4）结论
①实验结果表明，刺槐休眠期总糖含量及淀粉含量与来年花蜜含糖量相关关系显著（P＜0.05），呈高度正相关。刺槐休眠期总糖、淀粉含量高，是来年植物体开花泌蜜，花蜜含糖量高的重要营养基础。
②刺槐休眠期可溶性糖、蛋白质含量及C/N与来年花蜜含糖量间相关关系不显著，P＞0.05，即休眠期刺槐枝条中可溶性糖，蛋白质含量及C/N的高低对来年花蜜含糖量的高低无显著影响。蛋白质含量与来年花蜜含糖量间呈弱负直线相关，r＝－0.1869，但在统计学上表现为不显著。
③气候条件对花蜜浓度影响较大。早晨花蜜浓度最低，中午达最高，下午又开始逐渐降低。这主要是由于随着气温升高和湿度减小，花蜜中水分蒸发加快而造成浓度升高。气候条件是影响花蜜浓度的外因，而休眠期树体总糖及淀粉含量的积累则是影响花蜜浓度的内因。
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