农杆菌转化法详细过程

Question

如题所述

Answer 1

农杆菌转化法详细过程如下：

1、获得目的基因：用限制性内切酶切割目的基因。基因工程示意图。

2、基因表达载体的构建：目的基因与载体（多为质粒）通过DNA连接酶连接。

3、将目的基因导入受体细胞：将含有目的基因的重组质粒导入根癌农杆菌（根癌农杆菌为受体细胞）。

4、目的基因的检测和鉴定：DNA分子杂交/分子杂交/抗原抗体杂交/个体生物学水平的鉴定（此方法需要导入重组细胞的植物体，详见步骤5）。检测采用几种方法（根据需要选择不同的方法）。

5、最后，将成功表达的细胞导入植物，并鉴定植物的个体生物学水平。

农杆菌转化法的作用

根癌农杆菌是一种生活在土壤中的微生物，在自然条件下可以侵染双子叶植物和裸子植物，但没有侵染大多数单子叶植物的能力。当植物受到伤害时，伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物，这些酚类化合物会吸引土壤杆菌向这些细胞移动。

农杆菌中Ti质粒上的T-DNA（可转移DNA）可以转移到受体细胞中，并整合到受体细胞染色体的DNA中。根据农杆菌的这一特性，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA中，通过农杆菌的转化，目的基因可以进入植物细胞，并插入到植物细胞的染色体DNA中，从而使目的基因的遗传特性得以稳定保持和表达。