补体介导的细胞毒试验（complement dependent cytotoxicity test）的原理是特异性抗体与细胞膜上相应抗原结合后，在补体的参与下，可产生细胞膜损伤，细胞死亡；不带相应抗原的细胞仍然存活。利用染料排斥实验判定淋巴细胞死活状态，活细胞不着色，具有折光性，大小也正常。死细胞着色，体积增大。下面以HLA-A、B、C抗原检测为例。
【材料】
1.Terasaki塑料板（60孔或96孔）、Fisher离心管、Fisher离心机、水平式离心机、倒置显微镜、血细胞计数板、普通显微镜、毛吸滴管、大试管、中试管、橡皮乳头、温箱、火花真空检测器。
2.肝素抗凝剂（1000U/0.5ml/管）、Hanks液（pH7.2）、McCoy培养基、淋巴细胞分离液（比重1.077）、50 g/L 伊红 Y、34-40%中性甲醛、生理盐水、凝血酶。
3.兔补体 20只以上兔的新鲜血清混合而成，分装于灭菌青霉素小瓶内。在无HLA抗血清时应无淋巴细胞毒性；1；2稀释应仍能使分型血清反应结果记分为8分（见本实验结果判定）。不稀释，-70℃储存备用。用前半小时，取出室温融化，使用后剩余液弃去，不得反复冻融。
4.淋巴细胞悬液
（1）取肝素抗凝外周血10~15ml，1800rpm 离心10~15min。
（2）取白细胞层（1.0~1.5ml）加至含1.5 ml Hanks液的中试管中。
（3）用毛吸滴管混匀，轻轻沿管壁加在盛有1.5 ml淋巴细胞分离液的离心管中，使之重叠于淋巴细胞分离液上，分层良好。
（4）2000 rpm 离心20min。
（5）吸取单个核细胞层细胞，加入Fisher离心管中，用Fisher离心机4000rpm 离心5min。
（6）弃上清，加Hanks液，1500rpm 离心10min，以去除血小板。
（7）弃上清（内有血小板），加Hanks液混匀，加一滴凝血酶。
（8）转动Fisher离心管，促凝，至血小板凝块产生（约2 min左右）。
（9）1500 rpm 离心10min，使血小板凝块沉淀。
（10）取上层悬液转至新Fisher管中，1500 rpm 离心10min。
（11）弃上清（去除凝血酶），加Hanks液重悬细胞，1500 rpm 离心15min，弃上清，重复此步骤1次。
（12）弃上清，用McCoy液悬起细胞，并调整细胞浓度至1.5~2´106/ml。
（13）如细胞悬液中还含有红细胞，可加抗A、抗B、抗H处理，去除。
5.HLA血清板
（1）取干净Terasaki塑料板，各孔中加入一定量石蜡油。
（2）用干净微量注射器加1ml各种已知的对照血清和特异性抗血清于相应各孔中。
（3）置-70℃或-80℃冰箱中保存备用（保存期为6~12个月）。
6.对照血清 阴性对照最好选用健康男性无输血史的AB型血清，56℃30min灭活，或选用56℃30min灭活的健康人混合血清。阳性对照采用马抗人淋巴细胞。
7.特异性抗体 采用经产妇血清、多次受血者的血清、计划免疫志愿者的血清、肾移植排斥者的血清或单克隆抗体。
【方法】
1.自-80℃冰箱中取出HLA血清板，在室温下融化。
2.标记血清板，标明待检细胞号码。
3.将待检的T淋巴细胞或总的外周淋巴细胞充分混合（1.5´106~2´106/ml）。
4.用软滴法加1ml细胞悬液于各孔中，并使之与血清充分混合（用火花真空检测器混匀），室温（25℃）下30min。
5.每孔加兔补体5ml，室温（25℃）下培养60min。
6.每孔加5ml伊红染液，2 min后，加中性福尔马林5ml于各孔中。
7.将50´75mm2玻片放在血清板上使各孔液滴扁平。置倒置显微镜下检查细胞存活百分率。
【结果】
结果记录以“6”或“8”为确切阳性反应。细胞死亡则被染料着色，细胞呈灰暗色，体积增大，说明细胞表面有与特异的HLA抗体相对应的抗原；如果淋巴细胞表面没有与特异的HLA抗体对应的抗原，则细胞不着色（着色细胞数<10%~19%）。或细胞具有折光性，大小正常。
<10%细胞死亡，记1分，为阴性
11%~19%细胞死亡，记2分，为阴性
20%~29%细胞死亡，记4分，为阳性可疑
30%~80%细胞死亡，记6分，为阳性反应
>80%细胞死亡，记8分，为强阳性反应
在阴性对照和阳性对照结果均正确的情况下，按“多数反应原则”确定受检细胞抗原。若结果异常，须仔细检查每一步操作程序及试剂等是否符合要求，必要时重做。对于初学者，记4分的记录，最好请有经验者复查及判定结果，不要轻易下结论。
【讨论】
1.注意事项
（1）此试验的关键在于获得各种HLA标准抗血清，由于HLA抗体不是天然形成，不需经同种异体抗原刺激产生。目前标准分型血清的主要来源是经产妇和计划免疫者。
（2）要注意淋巴细胞的存度与活性，因为粒细胞和
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