实验一：使用高倍显微镜观察几种细胞
一、实验目的：
1、学会如何使用显微镜观察细胞；
2、了解细胞的结构；
3、学会制作临时装片。
二、实验材料：（实验材料可换）松针、动物血液、动物神经细胞永久装片
三、实验用具： 载玻片、盖玻片、蒸馏水、滴管、镊子、土豆、刀片、显微镜（物镜5X、10X、40X）
四、方法步骤：
1、制作松针的临时切片：
（1）取干净的载玻片一个平置于试验台上，用滴管在载玻片中央滴一滴蒸馏水。
（2）将土豆切成条状（截面约：0.5X12.5px)取两条，将一根松针夹在两个土豆条之间，用刀片削成尽量薄的薄片，削时，手腕不动，靠大臂带动小臂移动刀片。切片数次。从中选取较薄的切片，置于载玻片的水滴上。
（3）从一侧轻轻盖上盖玻片，不要产生气泡。用吸水纸轻轻吸去盖玻片周围的水滴，即完成临时切片的制作。
2、观察切片：
（1）取出显微镜，置于试验台上靠左的位置，打开光源。
（2) 将上步制作好的切片置于显微镜的载物台上，调整载物台位置，使盖玻片对准光源。
（3）使用5X物镜观察切片，使松针切片在视野中心，换成10X物镜，观察松针叶面横切结构。
（4）换成40X物镜观察，注意细胞及细胞内物质结构，画图。
3、 动物血液临时装片的制作及观察（除了不用切片，其他类似）
4、 动物神经细胞永久装片的观察。
五、考点提示：
1、松针的叶面结构是什么样的？
2、动物细胞的结构是什么样的？与植物细胞又什么不同？
3、显微镜的物镜倍数愈大，视野的亮度如何？物体的大小如何？
4、如何调节焦距？
5、如何才能使切片尽量的薄？切片的厚薄对显微镜下观察的效果有什么影响。
实验二：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质
一、实验目的：
尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质，阐明实验原理—颜色反应，识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色，初步掌握鉴定上述化合物的基本方法，学会描述实验现象，掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。
二、实验原理：
某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。
1、生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖分子内没有，为非还原糖。实验中所用的斐林试剂，只能鉴定生物组织中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖。可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu 2O沉淀。如：
葡萄糖 + 2Cu2+ + 4OH— 加热 葡萄糖酸 + Cu 2O↓（砖红色）+ H 2O
即Cu 2+被还原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。
用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色沉淀
淀粉遇碘变蓝色（直链）或紫（红）色（支链）。
2、脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。
脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。
在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹黑及油红O等。脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理，适当提高温度（37℃-60℃）对组织切片染色效果是有好处的。
脂类染色，用冰冻或石蜡切片，以水溶性封固剂封固，如甘油、明胶和阿拉伯糖胶等。
脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色或橙红色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色），胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。
3、蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。）
三、实验材料：
1、做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）经试验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。
2、做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。
3、做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。
4、淀粉的鉴定：马铃薯匀浆。
四、实验用具：双面刀片、试管（最好用刻度试管）、试管夹、试管架、大小烧杯、小量筒、滴管、酒精灯、三脚架、石棉网、火柴、载玻片、盖玻片、毛笔、吸水纸、显微镜
五、实验试剂：
1．斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液）
2．苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液
3．双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）
4．体积分数为50%的酒精溶液
5．碘液
6．蒸馏水
六、方法步骤：
一、可溶性糖的鉴定
操 作 方 法
注 意 问 题
解 释
1. 制备组织样液。
（去皮、切块、研磨、过滤）
苹果或梨组织液必须临时制备。
因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。
2. 取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。
3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。
应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂；
切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。
斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu ( OH ) 2在70~ 900C下分解成黑色CuO和水；
甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无Cu OH生成。
4. 试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色 →棕色 → 砖红色（沉淀）
最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。
也可用酒精灯对试管直接加热。
防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；
缩短实验时间。
二、脂肪的鉴定
操 作 方 法
注 意 问 题
解 释
花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。
干种子要浸泡3~4小时，新花生的浸泡时间可缩短。
因为浸泡时间短，不易切片；浸泡时间过长，组织较软，切片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。
在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，染色1分钟。
染色时间不宜过长。
用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。
酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。
用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上1~2滴蒸馏水，盖上盖玻片。
滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。
低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。
装片不宜久放。
时间一长，油滴会溶解在乙醇中。
三、蛋白质的鉴定
操 作 方 法
注 意 问 题
解 释
制备组织样液。
（浸泡、去皮研磨、过滤。）
黄豆浸泡1至2天，容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。
鉴定。加样液约2ml于试管中，加入双缩脲试剂A，摇匀；再加入双缩脲试剂B液3~4滴，摇匀，溶液变紫色。
A液和B液也要分开配制，储存。鉴定时先加A液后加B液。
CuSO4溶液不能多加。
先加NaOH溶液，为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B液混装或同时加入，会导致Cu2+变成Cu ( OH ) 2沉淀，而失效。
否则CuSO4的蓝色会遮盖反应的真实颜色。
可用蛋清代替豆浆。
蛋清要先稀释。
如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。
附：淀粉的检测和观察
用试管取2ml待测组织样液，向试管内滴加2滴碘液，观察颜色变化。
碘液不要滴太多
以免影响颜色观察
七、考点提示：
1、常见还原性糖与非还原性糖有哪些？ 答：葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。 2、还原性糖植物组织取材条件？ 答：含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。 3、研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？ 答：加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。 4、斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？ 答：混合后使用；产生氢氧化铜；氢氧化铜不稳定。 5、还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为？ 答：浅蓝色棕色 砖红色。6、花生种子切片为何要薄？ 答：只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。 7、转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？ 答：切片的厚薄不均匀。 8、脂肪鉴定中乙醇作用？ 答：洗去浮色。 9、双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？先加A液的目的怎样通过对比看颜色变化？ 答：不能混合；先加A液的目的是使溶液呈碱性；先留出一些大豆组织样液做对比。
实验三：观察DNA和RNA在细胞中的分布
一、实验原理：
1、真核细胞的DNA主要分布在细胞核内，RNA主要分布在细胞质中。
2、甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA显现出绿色，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。
3、盐酸的作用
① 盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；
② 盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合
二、实验材料：人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞
三、实验用具：大小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台、
石棉网、火柴、酒精灯、吸水纸、显微镜
四、方法步骤：
1、取材
① 滴：在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液；
② 刮：用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下；
③ 涂：将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中；
④ 烘：将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。
2、水解
① 解：将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解；
② 保：将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。
3、冲洗涂片
① 冲：用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟；
② 吸：用吸水纸吸去载玻片上的水分。
4、染色
① 染：用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色5分钟；
② 吸：吸去多余染色剂；
③ 盖：盖上盖玻片。
5、观察
① 低：在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；
② 高：转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。
五、考点提示：
1、取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；
2、取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞；
3、冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗；
4、用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂；
5、烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却1分钟。
实验四：体验制备细胞膜的方法
一、实验原理：细胞膜的流动性和半透性
二、实验材料：猪（或牛、羊、人）的新鲜的红细胞稀释液（血液加适量的生理盐水）
三、实验用具：蒸馏水、试管、吸水纸、载玻片、盖玻片、显微镜
四、方法步骤：
1、用试管吸取少量红细胞稀释液，滴一小滴在载玻片上，盖上盖玻片，制成临时装片
2、在高倍镜下观察，待观察清晰时，在盖玻片的一侧滴一滴蒸馏水，同时在另一侧用吸水纸小心吸引，注意不要把细胞吸跑。上述操作均在载物台上进行，并持续观察细胞的变化。可以看到近水的部分红细胞发生变化；凹陷消失，细胞体积增大，很快细胞破裂，内容物流出。
五、考点提示：
1、选择动物细胞进行实验的原因：动物细胞无细胞壁。
2、选择哺乳动物成熟红细胞进行实验的原因：人和其他哺乳动物成熟红细胞无细胞核和众多的细胞器（膜），可以得到较纯净的细胞膜。
3、细胞破裂后，用什么方法获得较纯的细胞膜：将涨破的细胞溶液，经过离心分离得到细胞膜。
4、如何获得植物细胞膜：先用纤维素酶和果胶酶将植物细胞壁水解得到原生质体；再将原生质体放入清水中，水自由扩散进入，原生质体涨破；最后经过离心分离得到植物细胞膜。
5、稀释及稀释的时候用生理盐水的原因：稀释后，可以减少血液中的血浆蛋白等杂物。用生理盐水是为了保持渗透压，防止在稀释的时候就发生细胞破裂。
实验五：用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体
一、实验原理：
1、叶肉细胞中的叶绿体，呈绿色、扁平的椭球形或球形，散布于细胞质中，可以在高倍显微镜下观察它的形态。
2、线粒体普遍存在于动物细胞和植物细胞中，健那绿染液能使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色。通过染色，可以在高倍显微镜下观察到处于生活状态的线粒体的形态有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。
二、实验材料：新鲜的藓类的叶、人的口腔上皮细胞、新配制的质量分数为1%的健那绿染液（将0.5g健那绿溶解于50mL生理盐水中,加温到30-40摄氏度,使其充分溶解）
三、实验用具：显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、消毒牙签
四、方法步骤：
1、观察叶绿体
低倍镜下找到叶片细胞→低倍镜下找到叶片细胞→高倍镜下观察。
2、观察线粒体
染色→制片→低倍镜下找到口腔上皮细胞→高倍镜下观察。
五、考点提示：
1、观察叶绿体时选择藓类叶的原因：藓类属于低等植物，叶片是绿色的单层细胞，不需加工即可进行观察。
2、临时装片中的材料要随时保持有水状态的原因：保证细胞器的正常形态并能悬浮在细胞质基质中，否则，细胞失水收缩，将影响细胞器形态的观察。
实验六：植物细胞的吸水和失水
一、实验目的：
1、学会使用显微镜观察植物细胞质壁分离和复原。（与前面的知识：显微镜的使用联系）
2、观察不同浓度的溶液对细胞吸水失水的影响，掌握此种方法的具体应用。
3、通过观察植物细胞的吸水和失水，明确渗透系统的组成以及具体应用。
二、实验原理：
1、成熟的植物细胞放到一定浓度的溶液中构成一个渗透系统。当细胞大量失水时原生质层与细胞壁的伸缩程度不同，导致原生质层和细胞壁分离。
2、当外界溶液浓度大于细胞液浓度时，根据扩散作用原理，水分会由细胞液中渗出到外界溶液中，通过渗透作用失水；由于细胞壁和原生质层的伸缩性不同，细胞壁伸缩性较小，而原生质层性较大，从而使二者分开；反之，外界溶液浓度大于细胞液浓度，则细胞通过渗透作用吸水，分离后的质和壁又复原。
三、实验材料：紫色特别深的洋葱外表皮、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液、清水
四、实验用具：显微镜、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸
五、方法步骤：
1、用刀片在洋葱鳞片叶的外表面划一个小方块，用镊子撕取这一小块洋葱表皮，在洋葱的外表皮上，用刀片划一些方块，用镊子轻轻撕取一小块（撕取的仅仅是外表皮，不要撕得太厚，仍然作为一个问题留给学生）。在取标本时，可以将洋葱的内表皮朝外，外表皮朝里进行对折，不要太用力，然后取其外表皮作为材料，将它平展地放在载玻片中央的清水滴中，并盖上盖玻片。
2、用低倍镜观察洋葱表皮细胞中紫色的中央液泡大小，以及原生质层的位置。
3、从盖玻片的一侧滴入0.3g/ml的蔗糖溶液，在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引。这样重复几次，洋葱表皮细胞就侵润在蔗糖溶液中。注意重复3-4次。
4、再用低倍镜观察洋葱表皮细胞中紫色的中央液泡大小，以及原生质层的位置。
5、从盖玻片的一侧滴入清水，在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引，这样重复几次，洋葱表皮细胞就侵润在清水中。
6、还用低倍镜观察洋葱表皮细胞中紫色的中央液泡大小，以及原生质层的位置。
六、实验结论：
当外界溶液浓度大于细胞液浓度时，水分会由细胞液中渗出到外界溶液中，通过渗透作用失水；由于细胞壁和原生质层的伸缩性不同，细胞壁伸缩性较小，而原生质层性较大，从而使二者分开；反之，当外界溶液浓度低于细胞液浓度时，则细胞通过渗透作用吸水，分离后的质和细胞壁又复原。
实验七：比较过氧化氢在不同条件下的分解
一、实验目的：
通过比较过氧化氢在不同条件下分解的快慢，了解过氧化氢酶的作用和意义
二、实验原理：
新鲜的肝脏中含有过氧化氢酶，根据酶的专一性，可知其可以催化过氧化氢分解成水和氧。
三、实验材料：
质量分数为20%的猪肝研磨液，新配制的体积分数为3%的过氧化氢溶液，质量分数为3.5%的FeCl3溶液
四、实验用具：
量筒，试管，滴管，试管夹，试管架，卫生香，火柴，酒精灯，大烧杯，石棉网，温度计
五、方法步骤：
1、取4支洁净试管，分别编号1，2，3，4，向试管内分别加入2ml过氧化氢溶液。
2、将2号试管放在90℃左右的水浴中加热，观察气泡情况，并与1号试管作比较。
3、向3号试管内滴入2滴FeCl3溶液，向4号试管内滴入2滴肝脏研磨液，观察哪支试管产生的气泡多。
4、2至3min后，将点燃的卫生香分别放在3、4号试管内液面的上方，观察哪支试管中的卫生香燃烧更猛烈。
六、实验结论：
1、加热能促进H2O2的分解,提高反应速率；
2、酶有催化作用，与无机催化剂相比，酶具有高效性。
实验八：影响酶活性的条件
一、实验目的：
1、初步学会探索影响酶活性条件的方法。
2、探索过氧化氢酶在不同温度和PH下催化过氧化氢水解的情况。
二、实验原理：
淀粉遇碘后，形成紫蓝色的复合物。麦芽糖和葡萄糖遇碘后，不形成紫蓝色的复合物，但能
与斐林试剂发生氧化还原反应，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
三、实验材料：
质量分数为2%的新配置的淀粉酶溶液，新鲜的质量分数为20%的猪肝研磨液，
质量分数为3%的可溶性淀粉溶液，新配制的体积分数为3%的过氧化氢溶液，
质量分数为5%的盐酸，质量分数为5%的氢氧化钠溶液，蒸馏水，冰水，热水，
碘液，斐林试剂
四、实验用具：量筒，试管，滴管，试管夹，三脚架，火柴，酒精灯，小烧杯，大烧杯，石棉网，温度计，
五、方法步骤：
一、温度对酶活性的影响
1、取三支洁净的试管，编上号1，2，3，并分别注入2ml可溶性淀粉液。
2、分别向1，2，3号三支试管中各注入1ml新鲜的淀粉酶溶液，摇匀，依次放入沸水，37℃左右的热水，冰水中，维持各自的温度5分钟。
3、分别向1，2，3号三支试管中各滴入一滴碘液，然后摇匀。观察并记录这三只试管中，溶液颜色的变化情况。
二、pH对酶活性的影响
1、取三支洁净的试管，编上号1，2，3，并分别注入1ml的新鲜的淀粉酶溶液。
2、依次向1号，2号，3号试管中注入蒸馏水，氢氧化钠溶液，稀盐酸各1ml并摇匀。
3、分别向1号，2号，3号试管中各注入2ml可溶性淀粉溶液，震荡摇匀。
4、将三支试管的下半部浸到37℃左右的温水中，保温5分钟。
5、向三支试管中各加入2ml斐林试剂，震荡摇匀。
六、实验现象：
一、温度对酶活性的影响
1号试管中的液体未变蓝，2号和3号试管中的液体变蓝，且2号试管蓝色比3号试管深。
二、pH对酶活性的影响
2号和3号试管中的液体未变蓝，1号试管中的液体变蓝。
七、实验结论：
1、在最适宜的温度和最适宜的ph条件下，酶的活性最高。
2、温度和ph偏高或偏低，酶的活性明显下降。
实验九：叶绿体中色素的提取和分离
一、实验目的：
1、初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。
2、探索叶绿体中有几种色素。
二、实验原理：
1、叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂，酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取叶绿体中色素。
2、色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色素分离。
三、实验材料：
新鲜的绿叶（如菠菜的绿叶），无水乙醇，层析液（由20份在60~90℃下分馏出来的石油醚、2份乙醇和1份苯混合而成。93号汽油也可代用），二氧化硅和碳酸钙。
四、实验用具：
干燥的定性滤纸，试管，棉塞，试管架，研钵，玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，药勺，量筒（10ml），天平。
五、方法步骤：
（1）称取5g绿色叶片并剪碎
提取色素 研钵→研磨→漏斗过滤→
（2）加入少量SiO2、CaCO3和5ml丙酮 收集到试管内并塞紧管口
（1）将干燥的滤纸剪成150px长，25px宽的纸条，剪去一端两角（使层析液同时到达滤液细线）
制滤纸条
（2）在距剪角一端25px处用铅笔画线
（1）用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线
滤液划线
（2）干燥后重复划2-3次
（1）向烧杯中倒入3ml层析液（以层析液不没及滤液细线为准）
纸上层析 （2）将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁，轻轻插入层析液中
（3）用培养皿盖盖上烧杯
观察结果：滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带（如下图）
最宽：叶绿素a；
最窄：叶绿素b；
相邻色素带最近：叶绿素a和叶绿素b；
相邻色素带最远：胡萝卜素和叶黄素。
六、考点提示：
1、二氧化硅：为了使研磨充分；碳酸钙：保护色素免受破坏；丙酮：色素的溶剂。
2、扩散最快的是胡萝卜素（橙黄色），扩散最慢的是叶绿素b（黄绿色）。
3、滤纸上有四条色素带说明了绿叶中的色素有四种，它们在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散的快慢也不一样。
4、裁取定性滤纸时，注意双手尽量不要接触纸面，以免手上的油脂或其他脏物污染滤纸。
5、制备滤纸条时，要将滤纸条的一端剪去两角,这样可以使色素在滤纸条上扩散均匀,便于观察实验结果。
6、根据烧杯的高度制备滤纸条，让滤纸条长度高出烧杯25px ，高出的部分做直角弯折。
7、滤纸上的滤液细线如果触到层析液，细线上的色素就会溶解到层析液中，就不会在滤纸上扩散开来，实验就会失败。
8、画滤液细线时，用力要均匀，速度要适中
9、研磨要迅速、充分。a.因为丙酮容易挥发; b.为了使叶绿体完全破裂.从而能提取较多的色素;c.叶绿素极不稳定，能被活细胞中的叶绿素酶水解而被破坏。
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