农杆菌转化法中运用植物组织培育技术吗

Question

附．农杆菌转化法 步骤 1、获取目的基因．用限制酶切割下目的基因． 2、基因表达载体的构建．将目的基因与载体（大多数选用质粒）用DNA连接酶连接起来． 3、将目的基因导入受体细胞．将含目的基因的重组质粒导入农杆菌（农杆菌为受体细胞）． 4、目的基因的检测与鉴定．用DNA分子杂交技术/分子杂交技术/抗原-抗体杂交/个体生物学水平鉴定（这个方法需要导入重组后的细胞的植物体，详见第五步） 几种方法进行检验（根据要求选取不同方法）． 5、最后将成功表达的细胞导入植物体内，对植物体进行个体生物学水平鉴定． 第五点怎么理解，细胞怎么导入到植物体内？还是直接进行细胞培育成植株？

Answer 1

农杆菌是具有对植物细胞感染能力的杆形细菌，将含有目的基因的重组质粒导入植物细胞要进行二次导入。第一次用钙离子处理法增强农杆菌的细胞壁和细胞膜的通透性，从而将携带有目的基因的重组质粒导入农杆菌细胞，第二次导入是利用农杆菌的天然感染能力，将携带有重组质粒的农杆菌送入植物细胞。
含有目的基因的植物细胞需要运用植物组织培养技术进行培养到试管苗，再移栽到大田，让其自然产生种子，该种子即为转基因植物的种子。