高氏一号培养基配方是KNO3 0.1g、K2HPO4 0.05g、MgSO4· 7H2O 0.05g、NaCl 0.05g、FeSO4· 7H2O 0.001g （母液）、灭菌 1.05kg/cm2，20min。
配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入少于所需水量的沸水中，在火上加热，边搅拌边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到100ml，调pH，121℃灭菌20min。高温灭菌后，倒平皿前加入10%酚2滴至100ml培养基中混匀，将培养基倒入平皿内约15ml/皿。
高氏1号：可溶性淀粉（20g），KNO3（1g），K2HPO4（0.5g），MgSO4· 7H2O（0.5g），NaCl（0.5g），FeSO4· 7H2O（0.01g），琼脂 20g，pH=7.4-7.6。
操作步骤
1、称量和溶化：按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。然后再称取其他各成分，并依次溶化，对微量成分FeSO4 7 H2 O可先配成高浓度的贮备液，按比例换算后再加入。
待所有试剂完全溶解后，补充水分到所需的总体积。配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热融化，最后补充所损失的水分。
2、调pH：用试纸测培养基的原始PH，如果偏酸，用滴管向培养基中加入1mol/LNaOH，边滴边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用1mol/LHCI进行调节。
3、分装和加塞：将配制的培养基分装入试管内，在试管口或锥形瓶口上塞上棉塞。
4、包扎：加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一根麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
5、灭菌：将上述培养基以1210C，20min，0.103MPa高压蒸汽灭菌。
6、搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷却至500C左右，将试管口端搁在玻璃棒上。斜面的斜度要适当，使斜面的长度约为管长1/3。
7、无菌检查：将灭菌培养基放入370C的培养箱中培养24～28h，以检查灭菌是否彻底。和改良的差别就在于有没有FeSO4· 7H2O 高氏常常配完后变成褐色也是由于Fe2+氧化为Fe3+的关系，所以常常有人用螯合的FeSO4，防止氧化。