组织固定、包埋及切片实操指南

Question

如题所述

Answer 1

组织切片艺术：从取材到完美镶嵌的全程指南

制作一张令人信服的组织切片，如同艺术创作，需要严谨的步骤和精湛的技术。从取材开始，经由固定、透明化、包埋，最终切割成薄片，每个环节都至关重要。以下，我们将深入探讨取材后包埋与切片的实操技巧。

包埋的艺术：OCT与石蜡的选择

包埋方式主要有两种：OCT（聚二甲基硅氧烷）包埋适合于保持组织的抗原性，适用于ISH和IF，切片厚度通常在8~15μm，过程简洁，只需固定后置入OCT，冷冻凝固即可。然而，形态保存较差，不能立即切片时，需冷藏存储。石蜡包埋，如HE染色或IHC，能提供更薄的切片（4μm），但工艺复杂，依赖于组织类型和制作者经验，需不断优化条件。

石蜡包埋与切片的精细操作

实验材料清单：
- 动物组织
- 4%多聚甲醛（PFA）
- PBS缓冲液
- ddH₂O
- 二甲苯
- 梯度乙醇
- 石蜡
- 石蜡包埋机

步骤详解：

取材与固定：取新鲜组织，切割成3-4mm大小的块状，切勿过大。固定选用PFA，以1:7体积比，如做冰冻切片，可直接用丙酮固定。固定时间视组织而定，4℃下固定24-48小时。
洗去PFA：固定后，流水冲洗3次，确保组织充分清洗。
脱水透明：从30%乙醇开始，逐渐增加浓度，注意时间控制，尤其对小鼠肝组织，确保脱水和透明过程的精准操作。
浸蜡与包埋：石蜡在55℃下融化，分三次浸润组织，每次时间递增。包埋时，确保蜡液与组织切面平行，包埋后冷藏过夜，便于切片。
切片艺术：根据组织类型选择合适的厚度，如肝肺心4-6um，使用专业刀片，如R35，注意切片技巧和软硬组织的处理。
展片与烤片：切片展平后，用温水清洗并挑选无褶皱、形状完整的切片，烤片处理后备用。

注意事项：
- 组织新鲜度至关重要，长途运输宜选择干冰。
- 根据组织特性调整块体大小。
- 切割时刀片保持锋利，单向切割，避免损伤。
- 固定时间需根据材料和固定剂调整，控制硬化作用。

掌握这些步骤，您将能够制作出高精度的组织切片，为科研和临床分析提供坚实的基础。切片艺术，从这里开始你的探索之旅。