westen blot原理

Question

如题所述

Answer 1

Western Blot即蛋白质印迹法（免疫印迹试验），是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。

它是将电泳分离后的细胞或组织中蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。

Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，

且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

Western Blot的应用检测材料或药物对某个信号通路上蛋白靶点的影响：

肝癌是最常见的原发性癌症之一，仍是全球第六大癌症相关死亡原因。多靶点药物，如索拉非尼(SOR)，是肝癌治疗的主要抑制剂；然而较差的水溶性、缺乏选择性和明显的耐药性，使其应用受到限制。

上海理工大学李钰皓副教授研究团队用铋基介孔纳米材料(NBOF)负载SOR，然后用聚乙二醇和叶酸偶联物(P-FA)包覆，形成了NBOF@SOR-P-FA纳米载体体系。该系统通过将化疗和放射治疗相结合，实现了显著增强的抗癌效果。