在进行Western Blot实验时，可以从互联网上获取丰富的参考资料，但需根据具体实验需求进行个性化调整。以下是步骤概述：
首先，按照制造商的指示，使用两块清洁玻璃和0.75mm垫片，以及平板组装电泳装置的玻璃平板夹层，并将其固定在灌胶支架上。
接着，按照表7.1的配方配制聚丙烯酰胺分离胶液，确保脱气后加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌均匀。根据蛋白质分子大小选择5%（60-200kDa）、10%（16-70kDa）或15%（12-45kDa）的凝胶浓度。
使用巴斯德吸管，沿着垫片边缘快速倒入分离胶液，凝胶高度约为5cm。对于少量（少于10μl）样品，无需制作积层胶。
再用吸管加入1cm厚的水饱和异丁醇，从一个垫片边缘开始，慢慢覆盖凝胶表面，让其在室温下聚合30分钟。胶的聚合失败可能源于过硫酸铵或TEMED问题。
倾去异丁醇，用1×Tris-Cl/SDS, pH8.8缓冲液冲洗凝胶表面，吸干多余液体。
接着，按照表7.2的配方，配制积层胶液，倒入玻璃平板夹层，直到顶部。注意填满0.75mm厚的梳子孔隙。
让积层胶室温聚合30分钟后，将梳子插入，如有必要，添加积层胶液填充空隙。
在离心管中，用2×SDS加样缓冲液稀释待测蛋白样品，进行5-10分钟的100℃加热。对于沉淀物，先溶解再加样，并加标准混合物按供应商说明。
根据样品复杂性，选择合适的加样量。使用考马斯亮蓝或银染液显迹，注意控制样品量，以确保清晰的条带。
继续按照厂商指南进行电泳步骤，包括凝胶固定、电泳缓冲液添加、样品加样、电泳过程控制等。
电泳结束后，小心处理凝胶，包括定位、移除垫片、切边并进行转膜操作，选择适合的膜类型和电流参数。
转膜后进行清洗、封闭、抗体孵育和清洗步骤，一抗和二抗需适当稀释并按推荐时间孵育。
显色时，根据配方配制显色液，孵育后立即终止反应，用去离子水清洗。