什么是DNA的变性作用和复性作用

Question

如题所述

Answer 1

其实提取细菌基因组DNA并不是要用到上面提到的所有试剂。
TE是用来浮起细菌的。如果是阳性菌的话最好是用溶菌酶处理一下。
SDS可以让细胞裂解，并与核蛋白结合（当然也包括DNA）。蛋白酶K自然是降解蛋白的。到这一步可以直接用异丙醇沉淀，70%乙醇洗一次（洗去少量的盐分）。凉得差不多再用少量TE溶解就得到DNA了。
当然，在蛋白酶K处理过后，也可以用1.4M NaCl沉淀一下蛋白（DNA在此浓度溶解度增加，而蛋白减小）。或者用酚：氯仿：异戊醇（25：:24:1）PH>7.8抽提，去蛋白。其后依旧用异丙醇沉淀，70%乙醇洗。
CTAB/NaCl功能与SDS相当，但一般用于提取植物基因组。

追问：

我所用的方法加试剂流程确实是这样的。加入CTAB后沉淀很明显，前面加入5mol/L NaCl后也有沉淀，但较少。另外，第6步加入氯仿：异戊醇也是为了去蛋白吗？
加入酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）后离心，沉淀没有沉到底部，而是在水相和有机相之间，这是为什么？

回答：

氯仿：异戊醇也可以去蛋白，中间层的沉淀是不溶性的蛋白沉淀。因为密度比酚小，比水大，所以在中间层。细菌基因组是很好提的。你的流程太麻烦，可以再查查资料，减去一些。