普通烟草转入抗盐基因培育抗盐烟草的过程如图所示．已知含抗盐基因的DNA和质粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamH

Question

普通烟草转入抗盐基因培育抗盐烟草的过程如图所示．已知含抗盐基因的DNA和质粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位点，质粒上另有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因．请回答问题：（1）构建重组质粒时，应选用限制酶______对______进行切割，以保证它们定向连接．限制酶切断的是DNA分子中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的键，具体说就是______和______之间的键．（2）如果目的基因直接注入烟草细胞，一般会被烟草细胞______．质粒的作用是______．（3）切割后的目的基因与质粒由______酶连接成重组质粒．筛选导入重组质粒的细菌，应在其培养基中加入______，理由是______．（4）烟草细胞经______形成愈伤组织．某研究性学习小组以愈伤组织为材料进行了下列实验：一组在培养基中加30%的蔗糖，另一组不加蔗糖，接种后，每组再分成两个小组，分别在光下和黑暗中培养．1个月后，观察其生长、分化情况，结果见下表： 培养条件 加蔗糖 不加蔗糖 光照 正常生长，分化 不生长，死亡 黑暗 只生长，不分化 不生长，死亡你能得出什么结论？______．（5）从个体水平鉴定抗盐转基因烟草是否培育成功的方法是______．

Answer 1

（1）分析题图可知，构建重组质粒时，应选用salⅠ酶和HindⅢ酶对含抗盐基因的外源DNA和质粒进行切割，这样会形成不同的黏性末端，可以防止目的基因、质粒的自身连接，以保证目的基因和质粒的定向连接．限制酶切断的是DNA分子中特定部位的两个脱氧核苷酸的脱氧核糖和磷酸之间的磷酸二酯键．
（2）如果将目的基因直接注入烟草细胞，一般会被烟草细胞内的核酸酶分解而不能发挥作用．质粒的作用是作为运载体，将目的基因导入受体细胞．
（3）DNA连接酶可将切割后的目的基因与质粒连接成重组质粒．根据图中信息可知重组质粒带有抗氨苄青霉素基因，但四环素基因已被限制酶破坏，所以在筛选导入重组质粒的细菌时，可在不同培养基中分别加入氨苄青霉素、四环素，在添加氨苄青霉素的培养基中能成活，但在添加四环素的培养基中不能成活的即为导入重组质粒的细菌．
（4）烟草细胞经脱分化形成愈伤组织．从表中信息可知，在有蔗糖的条件下，细胞才能生长．在有光照的条件下，细胞才能分化．所以得出的结论是：细胞生长需要蔗糖，细胞分化需要光照．
（5）从个体水平鉴定抗盐转基因烟草是否培育成功的方法是：用一定浓度盐水浇灌或移栽到盐碱地中，观察转基因烟草的生长情况，以确定其是否具有抗盐性状．
故答案：（1）salⅠ、HindⅢ酶   含抗盐基因的DNA和质粒进行切割   脱氧核糖   磷酸   
（2）核酸酶分解   运载体   
（3）DNA连接 不同培养基中分别加入氨苄青霉素、四环素     添加青霉素的培养基中成活，四环素中不成活的为重组质粒．因为重组质粒带有抗氨苄青霉素基因，而四环素基因被破坏   
（4）脱分化    细胞生长需要蔗糖，细胞分化需要光照．   
（5）用一定浓度盐水浇灌或移栽到盐碱地中