用铜和稀硝酸来制备，在实验室中，通常用铜和稀硝酸反应来制备一氧化氮。
3Cu+8HNO3(稀)→3Cu(NO3)2+2NO↑+4H2O
这种制备的一氧化氮可能含有一定量的二氧化氮和少量氮气。在硝酸浓度和反应温度较低时，反应生成的气体中氮气也较低。如用铜和稀硝酸在其凝固点之上进行反应，以维持溶液不凝固，反应生成的气体几乎为纯的一氧化氮。
用亚硝酸钠和稀硫酸反应来制备,实验室中，还常用亚硝酸钠和稀硫酸在启普发生器中反应来制备一氧化氮。
6NaNO2+3H2SO4→3Na2SO4+2H2O+4NO↑+2HNO3
在带有滴液漏斗的1L烧瓶中，放入69g(1mol)亚硝酸钠粉末，慢慢滴加300ml2mol/L硫酸。产生的气体一氧化氮通过2个装有30%(10mol/L)氢氧化钠水溶液的洗涤瓶后，再通过装有玻璃棉和固体氢氧化钠的净化塔干燥。得产品16g(80%)进一步在液态空气下进行分馏，可得极纯产品。
可通过干法制备
3KNO2+KNO3+Cr2O→2K2CrO4+4NO↑
注意事项 (1)稀HNO3的浓度不宜偏高，否则可能会生产二氧化氮，也不能过低，否则反应速率过慢，以体积比1:4左右较为理想。 (2)铜片要用纯铜，因为有些合金元素可能会导致硝酸的还原产物混有二氧化氮气体。 (3)用胶塞塞住注射器针头之前要确保注射器内无空气，否则生产的一氧化氮会被氧化。
合成法，将氮与氧混合气体通过电弧，在4000摄氏度直接化合成一氧化氮N2+O2→2NO
催化氧化法，在钯或铂催化剂存在的条件下，氨在氧气或空气中燃烧生产气体一氧化氮，经精制、压缩等工序后，制得一氧化氮产品。
4NH3+5O2→Pt4NO+6H2O
热解法，加热分解亚硝酸或亚硝酸盐，获得气体经精制，压缩等工序，即制得一氧化氮产品。
酸解法，亚硝酸钠与稀硫酸反应制取粗一氧化氮，再经碱洗、分离、精制、压缩，可制得99.5%的纯一氧化氮。
3NaNO2+H2SO4(稀)→2NO↑+NaNO3+Na2SO4+H2O
据我们谱源气体收集得知：国内光明化工研究设计院就是采用此法生产一氧化氮的。
