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做细菌双杂交时为什么要用共转化呢?共转的效率好低啊。可否先把诱饵质粒转进去,做成感受态,再转文库?
听说这么分两步转,两种质粒就不是1:1了,先转进去的那个拷贝数会多些,于是筛出来的会有很多假阳性。是这样吗?哪位试过分两步转的来说说经验吧,可以代替共转吗?
PS.两种质粒都是低拷贝的
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推荐答案 2011-04-09
如果两种质粒同时转入细菌效率低的话,可以分两步转化:先转化一种质粒,然后把转化该质粒的细菌做成感受态,再转入另一种质粒,这样的效率会高很多。
转化效率低的一个原因是,制备感受态时细菌超过生长对数期了,变老了,这样对转化效率有很大的影响,尤其是在做双杂交的实验。
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