痰培养的采集及要求
痰培养操作流程
样本接收
1、标本识别与病人基本信息
2、 申请单内容与标本类型核对
3、标本外观与容器密闭性检查
肉眼筛选
1、合格标本(脓性)：黄色、灰色、血性、铁锈色，浑浊、稠厚，呈现
团块状的标本；
2、不合格标本(唾液性)：无色、白色、有黑色小点，清稀，呈现泡沫状，或者是有明显食物渣滓、纸屑灰尘、泥土的标本；
3、混合性标本：既有脓性成分又有唾液成分的痰标本。
镜下筛选
混合性标本：1、先进行洗涤，分离出脓性成分，再镜检；2、脓细胞>25个/HP且复层鳞状上皮<10个/LP的标本为合格标本，可进入下一步程序；而脓细胞<10个/HP或复层鳞上皮>25个/LP的标本为不合格标本，应拒收。
儿科痰标本：直接镜检做细胞学筛查。
显微镜检验
镜检原理：免疫学原理
镜检方法：先低倍镜再油镜，收寻20~30个视野中脓细胞聚集处，集中而不稠密，且周围无
鳞状上皮细胞或无大量成团状分布的细菌球的区域为读片区。
镜检内容：认真收寻脓细胞胞浆中有无吞噬的细菌，或者结节状脓细胞团块中有无菌丝的包裹，记录细菌的染色排列特征，菌体特征（如粗细、长短、扭曲）。
注意区分粘附与吞噬
注意辨认经抗生素治疗后形态变异了的细菌（小球体、巨球体、丝状体、斑驳染色）
镜检的免疫学原理
人体生理腔道粘膜中、粘膜下，以及无菌部位分布的
免疫细胞膜上的
Toll样受体种类及分子多态性程度不同。
粘膜中，由于菌群建立过程，伴随着免疫耐受过程的形成，这些部位Toll样受体种类相对单一，分子多态性程度低，可识别的异源性分子种类少，因而对多数正常菌群产生免疫耐受，表现为无应答。
当机体被微生物感染时，就会激发机体的
免疫系统，从而产生免疫应答。在细菌和真菌的感染中，侵袭性感染是最主要的感染类型。人体对侵袭性感染的主要免疫机制就是细胞渗出——包括早期的固有免疫（
中性粒细胞的浸润）和后期的
适应性免疫（免疫调理和细胞毒作用）。整个过程都始终贯穿着
白细胞的趋化、包裹、吞噬、消化等过程和胞内吞噬、多细胞包裹是易于辨认的具有重要意义的免疫现象。只要观察白细胞与微生物之间的“斗争”，我们就能正确区分“敌我双方”关系。
因而，具有吞噬和包裹现象的微生物就是感染菌。无吞噬现象的则可能为定植菌，也可能为感染菌（例如感染早期产生荚膜的细菌具有抗吞噬作用）。
痰液的接种
培养基基本组合：血平板、巧克力培养基（含
万古霉素）、麦康凯
特殊补充
怀疑为军团菌的加种BCYE-а培养基
怀疑为
百日咳的加种Boudet-Gengou培养基
怀疑为肺炎支原体感染的加种Hayflick双相培养基
怀疑为结核的接种L-J培养基或Middlebrook7H-10
痰培养环境
苛养菌：35℃，5%CO2环境，
相对湿度＞70%
普通细菌：35℃，普通大气环境，相对湿度＞70%
丝状真菌: 28℃，普通大气环境，相对湿度＞80%
读碟：目标菌落选取
结合镜下特征与菌落特征综合分析，并挑选菌体特征与菌落特征一致的细菌作为目标菌，作传代纯培养和进一步的鉴定药敏。
鉴定方法选择
1、手工试验：微量生化管、API系列
2、半自动：ATB（32种）、Autoscan、国产鉴定系统（上海复兴、珠海迪尔、珠海美华、山东新科、合肥恒星、温州康泰、杭州天和等15~30种）
3、全自动：梅里埃V2C（60种）BD phoenix100（45种）西门子MicroscanwalkAway-96（30种）
药敏试验
1、手工：纸片扩散法、MIC法、E-test法、 琼脂稀释法
2、半自动与全自动：简化双浓度折点法、ATB药敏简化、浓度分布MIC法、Phoenix100、Microscan、Autoscan、
3、动力学计算MIC法：VITEK2药敏
综合报告
1、未染色标本直接涂片结果：有无脓细胞、脓细胞数量、上皮细胞数量、二者比例、有无真菌孢子／菌丝、有无
寄生虫等；
2、Gram染色镜检结果：包括脓细胞数量、上皮细胞与胞外正常菌群数量与污染程度、脓细胞胞内吞噬细菌／真菌孢子的情况，炎性包裹物内细菌和真菌的存在情况、脓细胞和炎性包裹物内的细菌／真菌的染色特征、形态特征和排列特征；
3、细菌鉴定结果、特殊耐药机制、药敏试验测试结果；
4、检验结果与临床诊断和治疗相关性的评述与建议。
关于痰培养的阴性报告
1、不合格标本：退回，或直接涂片：鳞状上皮＞25/LP，白细胞＜10/LP，提示标本为唾液；
2、涂片染色：白细胞内未见明显细菌吞噬；
3、细菌培养：未分离出致病菌；
4、合格但未见吞噬标本；
5、直接涂片：可见较多/大量白细胞。