培养基母液配制的方法如何

Question

如题所述

Answer 1

配制培养基是花卉组织培养的首要环节。培养基的成分随着花卉的种类、不同的外植体、不同的培养阶段应当有所不同。一般来说，各种培养基都有大量元素、微量元素、维生素、激素、糖和琼脂等物质，有时还要在培养基里添加有机附加物，如活性炭、香蕉汁、椰子汁等。在生产上，首先选用已有的培养基配方，它是前人研究的成果，又是经过生产实践验证的。现在几乎各种花卉用的营养基配方都有，可以免去您再研究的麻烦，当然在生产实践中，也可适当改进。如果您找不到合适的配方，可先试用MS培养基，MS是Murashige和Skoog的缩写，他们二人于1962年研究出来了这种培养基。下面以MS培养基为例，介绍怎样配制。
（1）配制母液。把培养基中的必需元素按原配方量的50倍、100倍或1　000倍称量后制成一种浓溶液，这种浓溶液叫母液。在配制培养基时按比例分别量取母液稀释到所需的浓度即可。母液配好后贴上标签，放在0～4℃的冰箱中，可使用半年到1年，这样做可节省许多时间。可能产生化学反应的或溶解后产生沉淀的，不能放在同一个容器中。配制母液要用重蒸馏水。药物要使用分析纯或等级较高的化学纯。药物的称量和药液的定容都要准确。
母液①：硫酸镁18.5克，硝酸铵82.5克，硝酸钾95.0克。加水定容到1000毫升，浓度为培养基的50倍，配1升培养基时量取20毫升母液。
母液②：氯化钙22.0克。加水定容到500毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液。
母液③：磷酸二氢钾8.5克。加水定容到500毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液。
母液④：乙二胺四乙酸二钠3.73克，硫酸亚铁2.78克。加水定容到1000毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液。
母液⑤：硼酸620毫克，硫酸锰2230毫克，硫酸锌860毫克，硫酸铜2.5毫克，碘化钾83毫克，钼酸钠25毫克，氯化钴2.5毫克。加水定容到1000毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液。
母液⑥：肌醇5克，甘氨酸100毫克，烟酸25毫克，盐酸吡哆醇25毫克，盐酸硫胺素5毫克。加水定容到500毫升，浓度为培养基的100倍，配1升培养基时量取10毫升母液。
（2）配制培养基。配制每1000毫升培养基，称取6～10克琼脂作凝固剂，具体按配方要求称量，放在水浴锅上慢慢溶解。先在量筒内放入一定量的水，按照母液顺序和规定量，量取母液。当母液加完后，根据需要每升培养基再加入生长调节物质如吲哚乙酸或萘乙酸等，细胞分裂素类0.04～10毫克，细胞分裂素应用最多的是6-苄基腺嘌呤，加完后倒入已熔化的琼脂中。每1000毫升培养基加入蔗糖30克或根据要求确定，定容到所需的体积。继续加温，直到琼脂完全熔解。用盐酸或氢氧化钠对培养基的pH进行调节，多数培养基的pH在5.4～6.0之间，MS培养基的pH为5.7。
将配好的培养基趁热倒入培养容器中，培养基占容器体积的1/3～1/4。不要将培养基沾到容器壁上，否则容易被杂菌感染。然后及时加盖，进行高压灭菌，灭菌时要按高压灭菌锅的操作规程使用。在121℃、压力111千帕下维持15～20分钟，温度和时间都要严格控制。到时间后立即切断电源，当高压锅内压力降到常压后，开启放气阀，打开锅盖，取出灭菌好的培养基，放在接种室中培养3天，没被感染后才能用来组织培养。

Answer 2

一般配制成百倍浓度的。
譬如CoCl2溶液的培养基浓度是0.006%，那你就配制成0.6%的溶液，配制一升培养基的话取10ml即可。
通常我们的实际情况是同一个培养基需要配制多个母液，我们可以将多个微量元素配制在一起，然后在溶液里加几滴浓硫酸，保证母液的稳定性。
然后母液应该放在冰箱里4℃冷藏。最好是避光，譬如用棕色瓶分装或外裹一层牛皮纸。
使用时则尽量用干净无菌的吸管来移液，或者直接用移液器，枪头一般一次性使用。本回答被提问者采纳