液相色谱仪使用步骤是什么?

Question

如题所述

Answer 1

高效液相色谱仪使用步骤详解
1. 色谱柱准备
色谱柱是液相色谱中的核心部分，通常由内壁抛光的不锈钢管构成，内径约为4-5毫米，长度在100至250毫米之间。在使用前，需要按照气相色谱法清洗空柱，并通过匀浆法装填固定相。将色谱柱安装到仪器管路中，使用柱式机械往复泵输送脱气的流动相。在基线稳定后，可以使用苯、萘、菲等混合试液进行测试。色谱柱效率（柱效）和分离度是评价色谱柱性能的关键指标，柱效应在2至3万/毫升以上，分离度应大于1.5。为防止柱污染，通常会安装一个50毫米长、内径4-5毫米的保护柱（预柱），以延长色谱柱的使用寿命。
2. 流动相洗脱
流动相是溶解样品组分并在色谱柱中传递组分的溶剂。配制好的流动相应放置在贮液瓶中，并通过高压泵进入色谱柱。洗脱方式包括恒溶剂脱洗法（等度洗脱）和梯度洗脱法。等度洗脱中，溶剂配比在整个过程中保持恒定。而梯度洗脱法中，随着色谱过程的进行，溶剂的极性强度逐渐增强，这需要按照一定程序不断改变流动相的浓度配比，以便在一次色谱过程中分离性质相近的组分。需要注意的是，梯度洗脱法不适用于分子排阻色谱和用电化学检测的反相高效液相色谱。
3. 检测器使用
针对血药浓度检测，常见的检测器有紫外线吸收检测器、荧光发射检测器和电化学检测器。紫外检测器适用于对紫外光有吸收的药物，荧光发射检测器适用于能产生荧光的药物，而电化学检测器常用于检测儿茶酚胺类及具有酚类基团的药物和代谢物。这些检测器能够提供定性和定量分析，其灵敏度和重现性均较好。
4. 数据处理
现代高效液相色谱仪配备了数据处理系统，能够记录和分析色谱图，自动积分计算峰面积，并根据预设程序进行计算和报告分析结果。
高效液相色谱仪使用过程中常见问题及解决方法
1. 液相色谱仪系统问题
高效液相色谱仪的核心部件包括色谱柱、泵和检测器，这些也是容易出现问题的部位。
2. 常见问题及解决方法
- 柱压问题：柱压的稳定性直接影响色谱图峰形、柱效和分离效果。需要定期检查和维护，确保压力波动在合理范围内。
- 保留时间漂移问题：保留时间的改变可能由多种因素引起，需要针对具体情况进行排查。
- 异常色谱峰问题：色谱图中出现的无峰、负峰、宽峰、双峰、肩峰或不对称峰等情况，可能由样品前处理不当、色谱柱损坏或检测器问题引起。
3. 高效液相色谱仪的保养
日常操作条件包括恒温、恒湿的工作环境，以及远离高电干扰和高振动设备。还需要定期对泵、进样器、色谱柱和检测器进行清洗和保养，以维持仪器的最佳工作状态。
结语
在使用高效液相色谱时，要注意样品的处理、仪器的正确操作和维护。良好的记录习惯对于故障排除至关重要。遇到问题时，可以参考专业网站或向行业专家咨询。