探索CCK-8实验：细胞活力的秘密武器
在生命科学的诸多应用中，CCK-8试剂盒凭借其便捷性和准确性，成为细胞增殖、毒性检测和药物筛选的理想工具。它如何在细胞世界中施展魔法？让我们深入剖析其原理、步骤和注意事项。
实验应用
细胞增殖的精密计数器
细胞毒性的精确探针
细胞活性的直接评估器
药物筛选的筛选器
肿瘤药敏试验的得力助手
微生物毒性与增殖的测定专家
原理揭示
CCK-8的核心是WST-8，它在细胞内的脱氢酶催化下，转化为黄色的甲瓒染料，颜色深浅反映了细胞活力。简单来说，活细胞越多，形成的甲瓒越多，测量结果则揭示了细胞的生命活力。
实验配置
设备：离心机、细胞计数仪、CO2培养箱、显微镜和特定滤光片的酶标仪，以及多通道移液器等。
试剂：CCK-8试剂盒、基础培养基、抗坏血酸溶液、血清补充液、PBS缓冲液、DMSO稀释剂等。
动手操作
DAY 1：细胞计数并接种到预设的96孔板，培养24小时。
DAY 2：观察细胞，挑选均匀生长的孔，进行不同浓度样本的添加和观察。
DAY 3/4：CCK-8解冻、细胞活力检测、加入试剂、测量吸光度并分析。
操作指南
初次实验，建议先调整细胞数量和培养时间，适应不同细胞的生长特性。
接种时确保细胞悬液均匀，避免沉淀影响结果。
注意培养板边缘处理，确保测量准确。
药物筛选策略：根据研究目标调整浓度梯度。
处理样本时考虑血清影响，必要时使用无血清培养基。
确保加样过程无气泡，精确测量。
注意事项总结
设置对照孔：实验、阴性、阳性、空白，以保证结果的准确性。
计算公式：细胞存活率和抑制率，揭示药物效应。
参考文献为相关研究提供了深度见解，但请记住，实验操作务必谨慎，遵循专业指导，因为CCK-8实验是科学探索的一部分，而非商业投资或医疗建议。