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碱裂解法中三种溶液
碱裂解法中
哪些步骤或者试剂帮助核酸的沉淀
答:
方法:
依次加入下面三种溶液:溶液1:葡萄糖 50 mmol/L,EDTA 100 mmol/L,Tris-Cl 25 mmol/L,溶菌酶5mg/ml,pH 8.0 溶液2
:NaOH 0.2 mol/L,SDS 1 溶液3:5 mol/L KAc 60 ml,冰乙酸 11.5 ml,重蒸水 28.5 ml 其中溶液1作用主要是悬浮菌体,溶液2作用是裂解菌体,释放胞内物质,溶液3...
碱裂解法
提取质粒
三种溶液
的作用
答:
溶液
Ⅰ:葡萄糖是使悬浮后
的
大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部;EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂,其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性;可添加RNaseA消化RNA。溶液Ⅱ 此步为
碱
处理。其中NaOH主要是为了溶解细胞,释放DNA,因为在强碱性的情况下,细胞膜发生了从双层膜结...
用
碱裂解法
提取质粒DNA的,加入
溶液
1,容液2,容液3后各有哪些现象,原因是...
答:
溶液2中的主要成分是NaOH和SDS,是用来裂解细胞的。因为NaOH遇到二氧化碳容易反应生成碳酸氢钙,影响使用效果,因此要现配现用。SDS的话,低温容易产生沉淀。不过在37°C 水浴一下就好。主要还是NaOH的问题。溶液1主要是让菌体细胞充分悬浊于溶液,没有什么实际意义,可以不要。
溶液2是碱液
,目的在彻底破坏...
碱裂解法
原理
答:
为了方便理解,这里罗列一下
碱法
质粒抽提用到
三种溶液
:溶液I,50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA,pH 8.0;溶液II,0.2 N NaOH / 1% SDS;溶液III,3 M 醋酸钾 / 2 M 醋酸。 让我们先来看看溶液I
的
作用。任何生物化学反应,首先要控制好溶液的pH,因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液,是再...
SDS
碱裂解法
提取质粒DNA
中溶液
1
的
成分及作用是什么?
答:
溶液
Ⅱ 0.2M NaOH / 1% SDS 破细胞
的
主要是碱,而不是SDS,所以才叫
碱法
抽提。溶液Ⅲ 3M 醋酸钾 / 2M 醋酸 这一步的K置换了SDS(十二烷基磺酸钠)中的Na,得到PDS(十二烷基磺酸钾)沉淀;SDS易与蛋白质结合,平均两个氨基酸上结合一个SDS分子,钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分...
碱裂解法
提取质粒过程中,EDTA、溶菌酶、NaOH、SDS、乙甲酸、酚/氯仿等...
答:
溶菌酶用不着,
裂解
液1里面的东西就是一些盐类,2里面的东西是沉淀蛋白质的,酒精是沉淀dna的,酚氯仿是抽蛋白的
分子实验查漏补缺系列:SDS
碱裂解法
制备质粒DNA
答:
e) 加入150μL用冰预冷
的碱裂解
液III,盖紧管口,反复数次颠倒,使
溶液
III在黏稠的细菌裂解物中分散均匀,之后将管置于冰上3~5min。碱裂解液III加入后就会有大量的沉淀,这是先由d)步骤中加入的SDS与蛋白质结合,再由e)步骤中的钾离子置换SDS(Sodium dodecyl sulfate)中的钠离子变成了十二...
实验复盘四---重组质粒DNA小提
答:
质粒小提试剂盒(TIANprep Mini Plasmid Kit 离心柱型)--
碱裂解法
本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞,再通过离心吸附柱在高盐状态下特异地结合
溶液中的
DNA。 碱裂解法抽提质粒主要的试剂为溶液P1,P2,P3,其在抽提质粒DNA中的作用如下:Prepare: 检查试剂盒里的试剂是不是都在,2mL灭菌离心管,...
碱裂解法
原理
答:
碱裂解法的
原理是:高PH 的
溶液
会使细胞壁粕类从而使得DNA和蛋白质变性。将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中,会使细胞壁破裂,染色体DNA和蛋白质变性,将质粒DNA释放到上清中。尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏,闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离,这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。只要用碱...
质粒DNA提取和细胞基因组DNA提取的异同
答:
DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、
碱裂解法
。生物方式:酶法。质粒抽提方法即去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。二、提取原理不同 质粒DNA提取用到
三种溶液
以及硅酸纤维膜...
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