紫外吸收法测定核酸含量

Question

如题所述

Answer 1

采用紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验原理：
（1）蛋白质可作定量分析的原因：蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，所以蛋白质溶液在275 280nm具有一个吸收紫外吸收高峰。

在一定浓度范围内，蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比，服从朗伯-比耳定律，因此可作定量分析。该法测定蛋白质的浓度范围为0.1—1.0mg/mL。

（2）此种方法测量的准确度差一点的原因：由于不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量不同，所处的微环境也不同，所以不同蛋白质溶液在280nm的光吸收职也不同。

据初步统计，浓度为1.0 mg/mL的1800种蛋白质及蛋白质亚基在280nm的吸光度在0.3—3.0之间，平均值为1.25+/-0.51。所以此种方法测量的准确度差一点。

核酸对紫外光的最大吸收凤位于260nm处，而蛋白质位于280nm处，260nm的吸收仅为核酸的1/10，因此蛋白质含量较底时对实验影响不大；当样品中蛋白质含量较高时，将样品移至试管中，加入一定量稀盐溶液，用玻璃棒小心搅拌，使蛋白质沉淀。

滴加少量25%SDS溶液，边加边轻轻搅拌。加毕，在60℃水浴中保温10分钟，并不停轻轻搅拌，取出冷至室温，过滤可除去蛋白质。