如何测量RNA浓度

如题所述

1、超微量分光光度计测260nm吸收值计算。

可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。

2、也可以用RNA胶(凝胶成像)检测。例如:原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。在胶上就有三条明显大小不一的条带。凝胶迁移分析。可以用来研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是:结合了蛋白的RNA在凝胶中的迁移速率更慢,因而可以区分出结合蛋白与未结合蛋白的RNA条带。

扩展资料

1、RNA的功能是:

(1)具有肽酰转移酶的活性。

(2)为tRNA提供结合位点。

(3)在蛋白质合成起始时,参与同mRNA选择性的结合,在肽链的延伸中与mRNA结合。

2、原核生物的rRNA分三类:5SrRNA、16SrRNA和23SrRNA。

真核生物的rRNA分四类:5SrRNA、5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA。

S为大分子物质在超速离心沉降中的一个物理学单位,可间接反映分子量的大小。原核生物和真核生物的核糖体均由大、小两种亚基组成。

3、凝胶成像对DNA或RNA胶 进行切胶、拍照、观察、分析的实验室类仪器,凝胶成像系统可以应用于分子量计算、密度扫描、密度定量、PCR定量等生物工程常规研究。

参考资料来源:百度百科—核糖体RNA

参考资料来源:百度百科—超微量分光光度计

参考资料来源:百度百科—凝胶成像

参考资料来源:百度百科—RNA GEL SHIFT

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第1个回答  2017-11-02
一般通过总量,纯度与完整性三大项检测来确认RNA质量:
1总量:微量分光光度计测260nm吸收值计算。
2纯度:微量分光光度计测260nm/230nm吸收值的比值,用于评估有机溶剂残留;260nm/280nm吸收值的比值,用于评估蛋白质污染比例。
3完整性:以Agilent Bioanalyzer进行毛细管电泳(capillary electrophoresis),并以软件的RIN(RNA Integrity Number)分数评估,10为RNA完整性最好,0为最差。

RNA质检参数中260、280、320、230nm下的吸光度分别代表了核酸、蛋白质、盐浓度和有机溶剂的值。其中:

A230: 测定其它碳源物质,如酚,糖类等。
A260:核酸的吸收峰测,测RNA,DNA,引物等的浓度用的。
A280:蛋白质的吸收峰。
一般的,我们只看OD260/OD280(Ratio,R)在1.8~2.1范围内时,我们认为 RNA中蛋白的污染是可以容忍的,不过要注意,当用 Tris 作为缓冲液检测吸光度时,R 值可能会大于 2(一般应该是<2.2的)。当R 1.8时,溶液中蛋白的污染比较明显,可以根据自己的需要决定这份RNA 的命运。当R > 2.2时,说明RNA已经水解成单核酸了,而纯RNA的OD260/OD280的比值为2.0。本回答被提问者采纳