如何测量RNA的纯度和含量

如题所述

RNA胶(凝胶成像)检测。例如:原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。在胶上就有三条明显大小不一的条带。

凝胶迁移分析。可以用来研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是:结合了蛋白的RNA在凝胶中的迁移速率更慢,因而可以区分出结合蛋白与未结合蛋白的RNA条带。RNA-seq即转录组测序技术,把mRNA,smallRNA等用高通量测序技术把RNA的序列测出来。反映出RNA的表达水平。

RNA纯度:RNA在纯化过程中容易受到DNA、蛋白质及有机溶剂的影响,这些残存物将会影响以后的操作。光谱分析(NANODROP)利用物质对不同波长光的吸收度的不同,可以鉴别出溶液纯度及浓度。

组成结构

RNA和DNA一样,也是由各种核苷酸通过3′,5′-磷酸二酯键连接构成的多核苷酸链,但与DNA有一系列差异。 

在化学组成方面,RNA含核糖而不含脱氧核糖。含尿嘧啶而不含胸腺密啶。例外的是,每个tNA分子含有一个胸腺嘧啶,这是在RNA链合成后由尿嘧啶甲基化生的,此外,前面已提到,少数DNA含有少量核糖,但这些个别的例外并不能以此否定两类核酸组成上的差异。

以上内容参考:百度百科-核糖核酸

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第1个回答  2018-01-27
1. 相关概念
RNA质检参数OD260/OD280、OD260/OD230的意义。

260、280、320、230nm下的吸光度分别代表了核酸、蛋白质、盐浓度和有机溶剂的值。

A230: 测定其它碳源物质,如酚,糖类等。

A260:核酸的吸收峰测,测RNA,DNA,引物等的浓度用的。

A280:蛋白质的吸收峰。

一般的,我们只看OD260/OD280(Ratio,R)在1.8~2.1范围内时,我们认为 RNA中蛋白的污染是可以容忍的,不过要注意,当用 Tris 作为缓冲液检测吸光度时,R 值可能会大于 2(一般应该是<2.2的)。当R < 1.8时,溶液中蛋白的污染比较明显,可以根据自己的需要决定这份RNA 的命运。当R > 2.2时,说明RNA已经水解成单核酸了。纯RNA的OD260/OD280的比值为2.0。

2. RNA质量检验
RNA样品的品质检测一般分为总量,纯度与完整性三大项。

总量:微量分光光度计测260nm吸收值计算。

纯度:微量分光光度计测260nm/230nm吸收值的比值,用于评估有机溶剂残留;260nm/280nm吸收值的比值,用于评估蛋白质污染比例。

完整性:以Agilent Bioanalyzer进行毛细管电泳(capillary electrophoresis),并以软件的RIN(RNA Integrity Number)分数评估,10为RNA完整性最好,0为最差。

l RNA纯度

RNA在纯化过程中容易受到DNA、蛋白质及有机溶剂的影响,这些残存物将会影响以后的操作。光谱分析(NANODROP)利用物质对不同波长光的吸收度的不同,可以鉴别出溶液纯度及浓度。RNA溶液的A260/A280的比值是一种RNA纯度检测方法,比值范围一般为1.8-2.1。各项实验对RNA纯度要求不一,比如即使比值超出这个范围,RNA样品也一样可以用于一些普通实验中,如Northern杂交、RT-PCR、荧光定量PCR和RNA酶保护等实验。本回答被网友采纳
第2个回答  2018-01-27
章台夜思(韦庄)