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western blot配胶步骤
WesternBlot
基本原理及
步骤
答:
(1)切
胶
:打开胶板,将多余的胶切掉,弃去。(2)安装转膜设备:取出转膜板,白板朝下,依次放入海绵、三层滤纸、NC膜、胶、三层滤纸、海绵,之后将转膜板夹紧,置于转膜槽中,倒满转膜液。(黑胶白膜:转膜夹白色部分对应着膜,黑色部分对应着胶)(3)转膜:将转膜槽与Power正确连接。设置电流为300...
western blot
详细
步骤
答:
1、玻璃板对齐后放入夹中卡紧,然后垂直卡在架子上准备灌胶。2、配分离胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶
。待胶面升到玻璃板3/4位置时即可。然后胶上加一层水,液封后的胶凝的更快。3、当水和胶之间有一条折射线时,说明胶已凝了。倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。配浓缩胶,加入TEMED后立即摇匀...
求胃癌细胞的
western blot步骤
,可以直接写在小论文上发表的简洁版_百度...
答:
转膜完毕后,立即把蛋白膜放置到预先准备好的
Western
洗涤液中,漂洗1-2分钟,以洗去膜上的转膜液。从转膜完毕后所有的
步骤
,一定要注意膜的保湿,避免膜的干燥,否则极易产生较高的背景。用微型台式真空泵吸尽洗涤液,加入Western封闭液,在摇床上缓慢摇动,室温封闭60分钟。对于一些背景较高的抗体,可以...
做好
westernblot
需要注意各种细节,转给需要的你!
答:
2.灌胶时视线与胶面水平,注意操作,避免胶溅入眼睛中。 3.常温下半小时胶可凝固,若天气寒冷或需加快凝固,可将其置于37℃孵箱中,15min左右即可凝固。 4.若第二天早上立即跑胶,这样就不耽误午饭时间,可头天晚上先把
胶配
好,凝固后取下玻板,连夹子、梳子一同放入蒸馏水中,4℃过夜保存。 1.将玻板卡紧电泳槽...
western blot配胶
时为什么上层胶会断裂
答:
一、配胶 注意一定要将玻璃板洗净,最后用ddH2O冲洗,将与胶接触的一面向下倾斜置于干净的纸巾晾干
。分离胶及浓缩胶均可事先配好(除AP及TEMED外),过滤后作为储存液避光存放于4度,可至少存放1个月,临用前取出室温平衡(否则凝胶过程产生的热量会使低温时溶解于储存液中的气体析出而导致气泡,有...
western blot
具体操作
步骤
答:
三、操作
步骤
(一)蛋白质样品获得:细菌诱导表达后,可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞,真核细胞加匀浆缓冲液,机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃,13,000g离心15min。取上清液作为样品。(二)电泳:制备电泳凝胶,进行SDS-PAGE。(三)转移:(半干式转移)1、电泳结束后将
胶
条割至合适...
Western blot
实验需要准备什么试剂和耗材
答:
- 冰上骤冷样品,然后直接上样至SDS-PAGE
胶
。- 电泳至染料接近胶底部,停止电泳。4. SDS-PAGE凝胶电泳 - 选择合适的分离胶浓度,准备凝胶。- 配制浓缩胶并组装凝胶。- 上样并电泳,注意调节电压和时间。5. 转膜 - 准备PVDF膜,并在转移缓冲液中进行预处理。- 组装转膜三明治结构,确保无气泡存在。
westernblot
内参GAPDH成功了
答:
1.蛋白测定之后要加5X SDS上样缓冲液,该怎么加呢?是所有的标本一起加了,还是就算准备上样的量?经中心试验室CWW指点后才知道,可以一起加了。就是把蛋白样品的体积除以4就是了,这样的5Xbuffer就变为了1X。2.紧接着是
配胶
,也是一堆问题。过硫酸铵(AP),给我的是一支0.5g干粉,说明书说...
WB实验结果必须有柱状图吗
答:
Western Blot
实验
步骤
如下:第一步:收集蛋白样品。可以使用适当的裂解液,例如碧云天生产的 Western P 细胞裂解液 裂解液等,裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品。第二步:电泳。(1) SDS - PAGE 凝胶配制可以使用碧云天生产的 SDS - PAGE 凝胶配制试剂盒。(2)样品处理在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的...
western
blotting
的过程和原理
答:
二、操作
步骤
:(一)
配胶
1、注意一定要将玻璃板洗净,最后用ddH2O冲洗,将与胶接触的一面向下倾斜置于干净的纸巾晾干。分离胶及浓缩胶均可事先配好(除AP及TEMED外),过滤后作为储存液避光存放于4℃,可至少存放1个月,临用前取出室温平衡(否则凝胶过程产生的热量会使低温时溶解于储存液中的气体析出而导致气泡,有...
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