1取材和涂片 用毁脊髓法处死蟾蜍 方法是左手握住蟾蜍躯干和四肢 并用食指把头部压向腹面 在头和躯干之间可摸到一凹陷（即枕骨大孔处） 又手用解剖针插入凹陷处1～2mm深 即将针尖转向后伸入到椎管中捣毁脊髓 直到四肢伸直 肌肉松弛为止 然后将其腹面朝上放在解剖盘中 剪开胸腔 打开心包 小心地将心脏剪一小口 立即将心脏血滴于干净载玻片的一端（图11-1）用另一载玻片的一端边缘紧贴在血滴处 待血液沿其边缘展开后 以45‘角 均匀地向载玻片的另一端推移 两张载玻片一定要贴紧 推时要稍用力 使成较薄的血膜 放在桌上晾干 涂血动作一定要快 以免血液凝结 按此法涂3张血涂片
2 固定 将晾干的两张血涂片作好标记 㓎于70%乙醇中固定5分钟 室温下晾干
3 三录醋酸处理 将已固定的两张涂片㓎在90·C的5%三录醋酸中处理15分钟 取出后清水冲洗（一定要反复冲净片上残留的三录醋酸 这是染色成功的关键）
4 染色 一张血涂片放入0.1%酸性固绿液（pH2.0～2.5）中染色5～10分钟 另一张血涂片放入0.1%碱性固绿液（pH8.0～8.5）中染色0.5～1小时 两片均以用水冲洗 晾干 镜析
5 结果 在显微镜下观察 可见经酸性固绿染色后 因细胞质和核仁中有酸性蛋白分布 因此被染成绿色 细胞核中染色质部分未着色 经碱性固绿染色后 只有细胞核内染色质被染成绿色 说明这是细胞内碱性蛋白质存在的部位
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